2021-08-20【求助】求助应用总RNA建cDNA文库的实验步骤,多谢了

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实验非常不顺，想构建CDNA文库，但是从mRNA开始屡次失败，考虑主要是纯化过程中损失过多。想从总RNA入手，但是不知道实验步骤。不知那位大侠能提供总RNA建库的实验步骤。另外我现在手头有OligoDT,RT酶，苦于没有第二连合成试剂盒，不知道能否用普通PCR试剂盒Teq酶替代第二链合成过程中的DNA聚合酶I。好像有种方法合成第二链时，不需要另外的引物，利用降解的RNA作引物即可，我想直接设定PCR两个循环，合成第二链，不知方法可行否？愁啊，等着毕业，时间紧急，恳请帮忙。谢谢。