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什么是DNA沉淀（DNA Precipitation）? IIIFF互动问答平台

蚂蚁淘  /发布时间:1545759293 /浏览量:46   

DNAPrecipitation

Phenol(removesprotein)

  1. addequalvolumeofPhenol(=tris-saturatedPhenol-Chloroform-Isoamyethanol)
  2. vortex
  3. spin2minutesat12000rpm4°C
  4. transfersupernatanttoafreshtube(avoidaspirationoftheinterlayerororganicphase)

Chloroform(removesphenol)

  1. addequalvolumeofChloroform
  2. vortex
  3. spin2minutesat12000rpm4°C
  4. transfersupernatanttoafreshtube(avoidaspirationoftheinterlayerororganicphase)

100%Ethanol(precipitatesDNA)

  1. add0.1volume3Msodiumacetate
  2. add2.5volumes100%Ethanol
  3. vortex
  4. precipitateat:
    • -20°Covernight(+++)
    • -80°C1h(++)
    • dryice15min(+)
  5. spin20minutesat12000rpm4°C
  6. carefullypourout/aspiratesupernatant(donotloseDNA-pellet)
  1. carefullyadd1mLcold70%Ethanol(donotvortex)
  2. spin10minutesat12000rpm4°C
  3. carefullypourout/aspiratesupernatant(donotloseDNA-pellet)
  4. airdry10minutesatroomtemperature(donotoverdry,becauseDNAbecomeshardtodissolve)
  5. dissolvein:
    • 10mMTrispH7.5(+++)
    • TE-Buffer(++)-EDTAmayinhibitdownstreamenzymaticreactions
    • dH2O(+)-freezeat-20°CbecauseunbufferedDNAundergoesdegradation

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