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抗凝血DNA的提取方法 专区
1.分离外周血白细胞(1)取患者肘静脉血5ml,EDTA抗凝,2500rpm离心10min。(2)小心吸取上层血浆,分装到3个0.5ml离心管中。(3)在血细胞中加入3倍体积的溶血液,摇匀,冰浴15min。(4)2500rpm离心10min,弃上清。(5)加入10ml溶血液,摇匀,冰浴15min。(6)3000rpm离心10min,弃上清。(7)倒置离心管,去掉残液。(8)得白细胞,-80ºC冻存。2.从白细胞中提取基因组DNA(1)取白细胞,加4.5mlSE,使劲吹打,混匀。(2)沿管壁加入0.5ml的10%SDS。(3)加蛋白酶E50μl/管。(4)首尾轻摇10min,混匀。(5)37ºC水浴过夜。(6)第二天取出,沿管壁加3ml饱和NaCL,迅速手摇15秒,使蛋白变性析出。(7)4000rpm离心10min。(8)取出上清,放于另一管中,加入等体积的三氯甲烷,混匀15min。(9)2500rpm离心10min。(10)取出上清,加入等体积的三氯甲烷,混匀10min。(11)2500rpm离心10min。(12)取上清,转入50ml管中,加3倍体积无水乙醇。(13)首尾轻摇,见DNA絮状沉淀析出。(14)将DNA挑至管壁,75%乙醇洗涤2遍。(15)将DNA挑至0.5ml管中,冻干。(16)加TE300μl,使DNA溶解,4ºC保存。
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