1.方法的选择：对于两端序列已知的情况，可根据两端序列设计引物，选用普通的PCR方法。对于只知道一端序列的情况，可使用（rapidlyamplicationCDNAends）技术，RACE分为3"和5"两种（Gibco公司），也有两端N时逬行扩增的RACE（Clontech公司）。

2.PCR扩增的模板：PCR扩增的模板通常是指由mRNA逆转录而来cDNA第一链。PCR模板量的多少直接影响到扩增的结果。在逆转录过程中，通常会加入一些接头（univursaladaptor），以便进行PCR的单引物扩增（锚定PCR）。

3.PCR扩增的特异性：决定PCR扩增特异性的因素很多，但通常有以下几点：

3.1一股认为PCR反应所需的mRNA模板以仅为1ug。增加模板量可以提高扩增效率，但同时也使非特异产物增加。

3.2PCR中所使用的Taq酶通常有错配现象，出现频率约为0.2％～0.5％。所以可以使用一些具有3"-5"外切酶活性的高保真聚合酶，如Pfu酶、Vent酶（Biolab）及PyrobCST酶（Takara）等。

3.3通常认为增加退火温度及减低Mg^2＋浓度可以提高扩增的特异性。

3.4在PCR体系的操作中，将模板最后加入体系中及热启动等方法可以提高扩增的特异性。

4.扩增产物：对产物可以采用酶切或Northen和Dot的杂交鉴定，并结合扩增片段的大小来确定是否为目的cDNA。