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我现在做的课题研究的是肾脏肿瘤。其中有实验涉及到FISH。咨询和查阅过相关文献和公司,一个染色体荧光探针的价格贵的惊人(动不动近万),做过这方面实验的老师,情况是这样的吗?
我要做的是在石蜡切片上进行FISH实验,操作难度是不是很大?有没有公司可以帮助完成此类实验呢?
请知道的老师给我帮助,谢谢!!
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回复:时间:2021-07-26
你可以访问 http://genome.ucsc.edu/,http://www.ensembl.org/index.html,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/cyto/hbrc.shtml这些网站,查找定位于相应染色体位点的BAC(bacterial artificial chromosome)、PAC(P1 artificial chromosome)克隆,到sanger institute(http://www.sanger.ac.uk/)免费得到克隆,提取克隆质粒后以缺口平移或随机引物法标记地高辛或生物素等半抗原,也可直接标记荧光(但信号弱),就可以得到你需要的探针了,接下来就是做原位杂交了。在http://www.riedlab.nci.nih.gov/你可以得到一些有用的protocols。如果过去没有相应基础,初次接触这个会比较吃力,而且订购一些试剂也不便宜,还耗时。如果你不是做遗传学的,就只为了得到一个探针,还不如买商品化的探针试剂盒,买个小包装的,比如10人份的,每次加半量就可以做出来,当20人份用。
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回复:时间:2021-07-31
美国VYSIS的探针确实是很贵的,都要几万块,但做出来的效果确实比国产的好很多!操作难度嘛,严格按照说明上来做,主要是掌握一下酶消化的时间和杂交条件,摸好条件,还不算很难做的,VYSIS的探针做出来的结果很漂亮!国内也有FISH探针的公司,可以咨询一下是否有你需要的那种探针,便宜很多,也可以做出来的.
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回复:时间:2021-07-24
谢谢楼上的柚子老师,我查的文献就是人家用的都是VYSIS公司的,好贵,难道没有解决的办法吗?国内有可以合成寡核苷酸探针的公司,探针的序列应该是我们自己提供吧,是不是需要特定的序列才有特异性呢,在数据库里能查到我需要的探针序列吗?这些特定的序列是不是公司的商业秘密呢?
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回复:时间:2021-07-31
你可以访问http://genome.ucsc.edu/,http://www.ensembl.org/index.html,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/cyto/hbrc.shtml这些网站,查找定位于相应染色体位点的BAC(bacterialartificialchromosome)、PAC(P1artificialchromosome)克隆,到sangerinstitute(http://www.sanger.ac.uk/)免费得到克隆,提取克隆质粒后以缺口平移或随机引物法标记地高辛或生物素等半抗原,也可直接标记荧光(但信号弱),就可以得到你需要的探针了,接下来就是做原位杂交了。在http://www.riedlab.nci.nih.gov/你可以得到一些有用的protocols。如果过去没有相应基础,初次接触这个会比较吃力,而且订购一些试剂也不便宜,还耗时。如果你不是做遗传学的,就只为了得到一个探针,还不如买商品化的探针试剂盒,买个小包装的,比如10人份的,每次加半量就可以做出来,当20人份用。
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回复:时间:2021-07-30
展开引用issacfish你可以访问http://genome.ucsc.edu/,http://www.ensembl.org/index.html,http://www.ncbi.nlm.nih.gov/genome/cyto/hbrc.shtml这些网站,查找定位于相应染色体位点的BAC(bacterialartificialchromosome)、PAC(P1artificialchromosome)克隆,到sangerinstitute(http://www.sanger.ac.uk/)免费得到克隆,提取克隆质粒后以缺口平移或随机引物法标记地高辛或生物素等半抗原,也可直接标记荧光(但信号弱),就可以得到你需要的探针了,接下来就是做原位杂交了。在http://www.riedlab.nci.nih.gov/你可以得到一些有用的protocols。如果过去没有相应基础,初次接触这个会比较吃力,而且订购一些试剂也不便宜,还耗时。如果你不是做遗传学的,就只为了得到一个探针,还不如买商品化的探针试剂盒,买个小包装的,比如10人份的,每次加半量就可以做出来,当20人份用。......issacfish老师您好!看到您的回复我有个疑问,如何通过http://genome.ucsc.edu/找到定位于相应染色体位点的BAC克隆呢?感谢!
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