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【求助】瞬转、稳转? 细胞技术讨论版
qydsmile2021-08-21
可以做了 又不用表达个几十天的.....
GFP稳定转染的细胞做免疫荧光,被固定后到最后荧光显微镜下观察时, G...
寞比sln2021-08-20
之前转染了带GFP的质粒,冻存估计有半年了拿来复苏,想做后续实验,结果稳转的细胞荧光少还很弱,请问怎么办?急急急!.....
稳转细胞株构建/稳定株构建/耐药细胞株_价格厂家供应商_和元...
lifengna2021-08-19
稳转细胞株进行细胞增殖和周期时是否还需要加G418.....
实验Q&A:如何用慢病毒转染构建稳转细胞系
耳语仏2021-08-18
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选,前者操作简单,但是成功率很低,费时,假阳性高,最后可能导致几个月的工作白干了,慢病毒稳定株筛选方法比较简单,并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性,没有假阳性,慢病毒。.....
稳定转染细胞系的建立观察生物探索
无聊7Ns2021-08-17
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。.....
小白求助:shRNA质粒稳转细胞一般能转几个进去
血魇DUV2021-08-16
两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时.但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理.由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞内稳定存在,但是可以同时进入.稳定转染的细胞株,就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。.....
磷酸钙转染
肥沙褐匀0012021-08-15
转染的话一般是以克数来规范转染的质粒数量,所以会有很多质粒.一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外,还需要带有标记基因.标记基因可以被特定的抗体检测,从而判断是否有效表达.如果你要过表达的是某种蛋白,也可以直接通过该蛋白的抗体检测,对照是没有转染的同种细胞,这样表达效果就可以通过WESTERN BLOT看见了.过表达倒没什么标准,每种蛋白表达量也不一致,选择适合自己的浓度就好. 顺转的话,我们实验室采用lipo2000,具体步骤百度文库有,英文的protocol在lipo2000的说明书上也........
某基因shRNA感染稳转细胞株过表达该基因的质粒的问题 核酸基因技术...
戴蒙久兆182021-08-14
应该是通过病毒载体质粒上的标记基因比如说荧光的eGFP或者带嘌呤霉素抗性基因的用嘌呤霉素筛选吧!.....
转染细胞的稳定筛选方法和实验步骤
面忻2021-08-13
请问细胞转染质粒后想获得稳定细胞系,是先用流式细胞仪筛选后再用抗性培养基筛选吗?一般是转染后多久开始进行筛选.....
收到细胞株该如何处理?
最爱hi112021-08-12
帮同学问:最近要筛选一个人肺癌细胞稳定转染株,用什么方法比较好呢?目的细胞是人肺癌细胞,在其他地方看到有的用质粒,有的用慢病毒进行稳定株筛选,两种方法有什么区别呢,具体操作是什么呢?望有大神告知.....
质粒瞬转构建稳定细胞系?
星子11752021-08-11
6kb并不大,作为质粒转染是没有问题的。至于到底好不好转就跟你的细胞有关了,和细胞是否是稳转株关系不大。.....
维生素H
一戦成神marsking2021-08-09
最近因工作需要,欲购进一些生产用的细胞株和瞬转、稳转质粒,大家有什么推荐的品系和公司或网站,谢谢!!!主要需求:1.生产或生物制药用的,稳定细胞株如CHO-K1、GS和HEK293/HEK293T,以及与之对应的瞬转、稳转(重组整合)质粒(需详细图谱)。2.原始或改造细胞株,以及对应质粒,改造细胞株请详述细节,原因,优缺点,安全性等。3.希望大家积极推荐,实验用、生产用均可,原核、真核都行,网站或品系名称也行,只要大家觉得常用、稳定、安全、高产就行。4.请有意向的同仁回帖或将详细资料发至我163........
人血血小板衍生生长因子AB检测试剂盒
qishi51142021-08-08
我用腺病毒感染稳转细胞株,用到50微升的量都感染不起来,荧光不表达,PCR验证不出来?求问如果用polybrene该怎么加,转染之前预处理还是加病毒的时候加进去?.....
PAVEL NOVOTNY_
zf30272021-08-07
如题,我用PIRES2-EGFP(带/不带目的基因)转染HCT-116,G418筛选,筛选浓度为800µg/ml,两周后发现克隆要么不带荧光,要么荧光很淡,几乎看不出细胞的轮廓,估计挑出来也没用,请问这是什么原因,我下一步该怎么办?.....
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