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蚂蚁淘  /发布时间:1629912604 /浏览量:249   

X-galstainingofembryos

ProtocolsuppliedbyS.P.Yee(spyee@julian.uwo.ca)andJoeChan(cchan@hgmp.mrc.ac.uk).

Procedure

  • DissectembryosinPBS
  • Immediatelytransfertheembryostofixativeat4oC,incubateindarkfor1hour.
  • Rinsetheembryoswithrinsebufferatroomtemperature3x15minutes.
  • Incubateindarkwithstainingbufferat37oC3-7hoursorovernight.

Materials

  1. 10%NP40
  2. 1%Deoxycholate(0.5MEGTA(make1Manddilutewith4MNaOHtilldissolves.CheckpH=neutral,makeupvolumefor0.5M)
  3. 0.5MK3Fe(CN)6=1.65g/10ml(red)
  4. 0.5MK4Fe(CN)6=2.10g/10ml(yellow)
  5. 40mg/mlX-gal(indimethylformamide)
  6. 1MMgC12

1.Fixative

  • 4%ParaformaldehydeinPBS

2.RinsebufferFinalconcentrationStock

  • 5mMEGTA2.0ml
  • 0.01%Deoxycholate2.0ml
  • 0.02%NP400.4ml
  • 2mMMgCl20.4ml
  • Makeupto200mlwithPBS

3.StainingbufferFinalconcentrationStock

  • 5mMK3Fe(CN)60.4ml
  • 5mMK4Fe(CN)60.4ml
  • 5mMEGTA0.4ml
  • 0.01%Deoxycholate0.4ml
  • 0.02%NP4080祃
  • 2mMMgC1280祃
  • makeupto39mlwithPBS
  • add1mlofstockX-galsolutiontomakeupthefinalconcentrationof1mg/ml

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