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[求助]筛选细胞单克隆稳定株的好方法 经验共享 分析测试百科
二洋旣獎b38JV2021-08-06
稳定细胞株筛选是一个长期的过程，稳定细胞株筛选优化，有许多条件需要摸索，而且是从源头开始① 在构建载体时，目的基因直接整合到细胞染色体组上，最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法，因为转染效率没有保证② 高表达载体的构建，哺乳动物表达量一直是它自身的缺点，最好根据高表达载体定向的驯化细胞，提高蛋白表达量③ 细胞的选择，筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO，中国仓鼠卵巢细胞，由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株，而HEK293细胞则常用于瞬时转染④ 后期的筛选，双抗预防污染，筛........
实验Q&A:如何用慢病毒转染构建稳转细胞系 实验方法
2021-08-05
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选，前者操作简单，但是成功率很低，费时，假阳性高，最后可能导致几个月的工作白干了，慢病毒稳定株筛选方法比较简单，并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性，没有假阳性，慢病毒包装可能相对比质粒构建难度大，如果经费充足可以直接找公司包毒的。.....
稳转株构建细胞实验服务上海易选生物科技有限公司
red19862021-08-04
如题，需要对一株肝癌细胞构建稳转细胞株成默其中的一个基因，上海有哪家公司做这个效果比较好的呢？有知道的站友麻烦推荐一下谢谢。.....
转染抑癌基因KLF6对前列腺癌PC3细胞作用的实验研究手机知网
zph20042021-08-03
准备研究一抑癌基因在肿瘤细胞中的过表达的细胞学实验及动物实验，最近做稳转发现细胞不扩增，零星几个一直贴在皿里。对照的无抑癌基因的载体稳转效果就不错，药物筛选11天，发现有很多克隆出现了。试问：1)抑癌基因的研究一定要稳转的细胞吗？瞬转难道不也能说明一些问题吗？2）对于动物实验，稳转的细胞株是最好的，但是如果老是筛选不出稳转的细胞克隆有没有代替的方法？3）大家有什么好的经验来筛选抑癌基因的稳转细胞株克隆。最近做这个实验感觉像是在和细胞较劲儿，呵呵。.....
如何构建重组荧光质粒转染后稳定表达的细胞系
元超瞄2021-08-02
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。.....
【求助】稳转株的冻存 细胞技术讨论版论坛
zjliuzj2021-08-01
制备成功稳定转染细胞株后，能否再用瞬时转染的方法转入其它质粒？.....
mRNA细胞转染实验步骤 经验共享 分析测试百科
有恃无恐03502021-07-31
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。.....
稳定细胞系构建后可以开展哪些实验
苦也不太差°琼2021-07-30
稳定细胞系构建后可以开展哪些实验建立稳定细胞株,一般是根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物对靶...专注整体实验·服务生命科学已开展了数千个实验外包项目.....
稳转细胞株总是丢,怎么办? 分子生物 综合其他 论坛...
Chen02252021-07-29
转染或PEI转染293的细胞后，一种方式加筛选压力（puromycinorhygromycin），筛选后少量细胞存活，扩大培养后，发现没有阳性，另一种方式，转染后分单克隆，扩大培养后也检测不到阳性。原本转染24-72小时转染效率至少在50%，大部分可能是瞬转，但不会一个都没有整合到基因组吧，以前我用这种方法筛选成功过几株稳转株，但是最近一段时间都失败，有遇到类似情况的吗？想和大家交流交流.....
稳转细胞株筛选_价格厂家供应商_北京吉田生物科技有限公司_...
l小呆2021-07-28
1、请教各位老师，转染质粒DNA的HepG2及HUH7细胞，如何筛选稳转细胞株？2、有限稀释法有没有protocol？.....
转染细胞的稳定筛选方法 实验方法
饼饼4912021-07-26
稳定细胞株筛选是一个长期的过程，稳定细胞株筛选优化，有许多条件需要摸索，而且是从源头开始①在构建载体时，目的基因直接整合到细胞染色体组上，最好不要通过先瞬转在筛选稳定细胞株的这种方法，因为转染效率没有保证②高表达载体的构建，哺乳动物表达量一直是它自身的缺点，最好根据高表达载体定向的驯化细胞，提高蛋白表达量③细胞的选择，筛选稳定细胞株我们常用的细胞是CHO，中国仓鼠细胞，由于CHO具有诸多的优点因此适合用于筛选稳定细胞株，而HEK293细胞则常用于瞬时转染④后期的筛选，双抗预防污染，筛选细胞的时候........
昆虫细胞杆状病毒载体表达系统常用的细胞系有哪些_丁香花开_新浪...
2021-07-25
稳转细胞系常用的方法有脂质体转染和慢病毒转染进行稳定株筛选，脂质体法筛单克隆时间耗时长，假阳性高，且效率低，大概只有1%。病毒转染得到稳定细胞株的效率高，只是步骤繁琐。如果经费充足的话可以找公司包装病毒，如武汉的普健可以提供各种载体的构建及细胞株构建的技术服务。.....
【求助】构建好的稳转过表达细胞株,为什么又不表达目的基因了...
惊叹号7522021-07-24
转入目的基因但为什么不表达mRNA先提取RNA,反转录成cDNA,然后根据目的基因设计PCR引物,通过半定量RT-PCR确定目的基因表达.正因为检测的是mRNA,所以要先反转录成cDNA才能PCR......
什么是稳转株? 有奖问答 学术帮助 论坛学术科研互动...
kahn922021-07-23
稳定转染的细胞株，就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。.....
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