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反

转

录

酶

AMV

使

用

说

明

（

Promega

）

1、

产

品

简

介

Avian

Myeloblastosis

Virus

Reverse

Transcriptase

(AMV

RT，

AMV

逆

转

录

酶

)

催

化

以

DNA

、RNA

或

RNA-DNA

杂

交

体

为

模

板

的

DNA

聚

合

反

应

。它

需

要

引

物

(DNA

引

物

比

RNA

引

物

效

率

更

高

)以

及

Mg2+

或

Mn

2+

。

该

酶

具

有

固

有

的

RNase

H

活

性

，非

离

子

表

面

活

性

剂

和

氢

硫

根

化

合

物

可

在

体

外

增

加

该

酶

的

活

性

。

2、

特

点

温

度

稳

定

性

：

由

于

AMV

RT

在

较

高

反

应

温

度

下

较

稳

定

(37-58℃

)，

特

别

适

用

于

具

有

复

杂

二

级

结

构

的

模

板

的

逆

转

录

。

3、

应

用

1）

cDNA

第

一

链

和

第

二

链

的

合

成

2）

引

物

延

伸

和

RNA

测

序

3）

RT-PCR

（

使

用

Taq

DNA

聚

合

酶

时

，

50μ

l

PCR

扩

增

体

系

加

10μ

l

包

含

AMV

RT

和

提

供

的

AMV

RT

缓

冲

液

的

RT

反

应

液

。

如

果

使

用

的

是

GoTaq

®

DNA

聚

合

酶

或

者

PCR

Master

Mix

，

50

l

PCR

扩

增

体

系

加

25

l

的

RT

反

应

液

）

。

4、

使

用

方

法

1）

以

使

用

2

g

的

RNA

为

例

。

首

先

准

备

无

核

酸

酶

的

离

心

管

，

将

模

板

RN

A

加

入

到

管

内

，

然

后

加

入

引

物

，

引

物

加

入

比

为

0.5

g/

g

RNA

，

总

体

积

不

得

大

于

11

l。

最

好

不

要

改

变

引

物

模

板

比

。

70

℃

加

热

5min，

冰

浴

5min

，

短

暂

离

心

收

集

至

管

底

。

2）

将

下

列

成

分

加

入

到

上

述

退

火

后

的

引

物

-模

板

混

合

物

中

。
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