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反转录酶没有3-5外切活性,其保真度怎么保证呢?
大家做表达的时候,获取长CDNA片段怎么保证的呢?
我获得的2.5kb的片段,其中sequencing后发现有8个错突变,狂ft
高保真的KOD-PLUS扩增的,按道理说,PCR没这么夸张吧
请大家指点啊
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回复:时间:2005-12-29
Invitrogen的SuperscriptII或IIIKIT都是很好的反转录试剂盒,我用着感觉不错另外,您用的是反转录后的CDNA直接为模版进行PCR的,这样CDNA不一定很完整,直接P2.5KB的片断可能出现产量小或者错误多的情况。建议您将片断分成两段PCR后酶切连接。本人意见,仅供参考
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回复:时间:2006-01-04
--------------------------------------------------------------------------------不好意思上面有句话写错了是不是M-MLV反转录酶都有末端加C的功能啊?
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