一、材料

1.缓冲液和溶液

吸附/洗涤缓冲液（含0.5mol/LNaCl的TES缓冲液）

醋酸铵（10mol/L）

乙醇

冰预冷的水

NaCl（5mol/L）

TES

2.核酸和寡核苷酸

总RNA

3.专用设备

用于测量260nm吸光值的比色杯

有速度控制的微量离心机

Oligo(dT)_18-30—纤维素

旋转轮

55℃和65℃的水浴

二、方法

1.在一系列灭菌微量离心管中，将每份总RNA(上限为1mg)样品的体积用TES调整到600μl。封好管口，在65℃加热10min，然后迅速在冰上冷却到0℃。每份样品加75μl(0.1倍体积）5mol/LNaCl。

2.在每管中加50mg(500μl)平衡的oligo(dT)—纤维素，盖好管盖，室温下在旋转轮上温育15min。

3.用微量离心机在室温下离心，600~800g(约1500~2500r/min)，2min。

4.将上清移到一系列干净的离心管中，置冰上存放。

5.在含oligo(dT)的沉淀中加1ml冰预冷的吸附/洗涤缓冲液。温和旋涡震荡分散沉淀。将盖好盖子的离心管置于旋转轮上，室温下温育2min。

6.室温下，用微量离心机离心，600~800g(约1500~2500r/min),2min。弃上清。重复步骤5和6两次。

7.在含oligo(dT)的沉淀中加0.4ml冰预冷的双蒸灭菌水，温和旋涡震荡以重悬沉淀。立即在微离心机上离心，4℃，2min。

8.小心吸去上清。

9.回收结合的poly(A)⁺RNA：用400μl双蒸灭菌水重悬沉淀，在55℃温育5min，然后4℃离心2min。

10.将上清移至一系列干净的离心管中，重复步骤9两次，合并所有上清。

11.在上清中加0.2倍体积的10mol/L醋酸铵和2.5倍体积的乙醇，在-20℃存放30min。

12.回收沉淀的poly(A)⁺RNA：4℃离心，最大速度，15min。小心弃上清，用70%乙醇洗沉淀，短暂离心，吸去上清，将管盖打开，倒置数分钟，使大部分残留的乙醇挥发。

13.用小体积灭菌的DEPC处理的水溶解RNA。

14.估计RNA浓度。

15.保存样品。