产品描述

特性

高反应效率

粘性末端和平齐末端均可连接

限制性酶切片段的克隆

将linker或adapter连接到DNA片段的平齐末端

室温或16℃均有活性

概述该酶催化契合的双链DNA或RNA的5´-磷酸末端和3´-羟基末端形成磷酸二酯键。该酶不仅能够催化平滑末端或粘性末端DNA之间的连接，还可以修复双链DNA、RNA或DNA/RNA杂交双链中的单链切刻（1）。

来源纯化自E.coliC600pcl857pPLc28lig8（2）。

反应条件1X T4 DNA 连接酶缓冲液[50mMTris-HCl（pH7.5@25℃），10mMMgCl2，10mMDTT，1mMATP]。推荐DNA5末端浓度为0.1－1.0μM。16℃温育。

质保声明T4DNA连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义（粘性末端活性单位）1单位指在20μl1XT4DNA连接酶反应缓冲液中，16℃反应条件下，30分钟能使50%的经HindIII消化的λDNA片段[5端浓度为0.12μM（300μg/ml）]连接所需的酶量。

浓度400,000units/ml和2,000,000units/ml。

热失活65°C10分钟。

室温连接反应为方便起见，连接反应可以在室温（20-25℃）条件下进行。粘性末端连接：在20μl反应体系中加入1μlT4DNA 连接酶，反应10 分钟。平齐末端连接：在20μl 反应体系中加入1μlT4DNA连接酶反应2小时，或者加入1μl高浓度T4DNA 连接酶反应10分钟。

使用注意与大肠杆菌DNA连接酶需要NAD+作辅因子不同，T4DNA连接酶的辅因子是ATP。

稀释后的T4DNA连接酶应保存于-20℃，50%甘油贮存缓冲液（稀释缓冲液A，NEB#B8001）。如稀释后马上使用，则可用1XT4DNA连接酶反应缓冲液稀释。

只要在反应体系中补加1mMATP，连接反应就可以在NEB提供的四种限制性内切酶缓冲液

（NEBuffer-s）或在T4DNA多聚核苷酸激酶缓冲液中进行。