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利用基因工程技术将突变的IPA1基因转入水稻细胞中从而获得某水稻...
wbq_19812021-09-23
目前想做发根农杆菌的转基因实验，目的基因已经转入pART27和PBI121载体中。请问：再用发根农杆菌ATCC15834转化的过程中，还需要特异的双元载体么？谢谢各位,邮箱250754675@qq.com.....
基因敲除为什么用两个细胞系 两个序列
小豪剺亩s6X2021-09-22
基因打靶包括：胚胎干细胞的获得和培养、打靶载体的构建、重组ES细胞的筛选、嵌合体小鼠的制备、基因敲除小鼠的建立、Cre-loxP系统、FLP/FRT系统和条件性基因敲除、基因敲入和大规模ES细胞突变库的建立。 基本概念 1. 基因打靶：是利用同源重组技术来定点改变物种的基因组顺序和结构，从而在突变的个体内来研究基因及基因组的功能。 2. 基因敲除：是使用基因组中某个/某几个基因或基因的顺式元件产生缺陷，从而在突变体内。 3. 丧生正常的功能，来推测这些基因或元件原来在体内的功能。 基因敲入：在个........
腺病毒载体优点
newton1322021-09-21
病毒载体有哪些？有什么优缺点？.....
基因敲除新技术案例实例
cool2092021-09-20
黄单胞菌，革兰氏阴性，进行基因敲除。有什么样的载体可以选择？选择的依据是什么？敬请行家指教...........
【交流】请教一个有关报告基因的启动子载体构建问题! 核酸基因...
不言佳士2021-09-19
各位战友，请教一下问题，就是大家在构建报告基因的启动子区时，是如何选定启动子区的长度呢？　　第二个问题是不是构建的启动子区均要有一个TATA盒的结构在里面，不然构建的启动子如何就能驱动LUC的表达呢？　　第三个问题是，如果我们在构建时长度延至ATG之后100－200BP的启动子是否会影响LUC的表达呢？谢谢！.....
人B7H4启动子荧光素酶报告基因载体的构建及活性分析
逗比2号2021-09-18
我想用pGL3-ControlVector质粒与某基因构建重组载体与MicroRNA共转染进行荧光素酶报告基因检测，这样可行吗？.....
HIPK3基因3’UTR双荧光素酶报告质粒的构建及其与靶向miR146的...
霸道AQik32021-09-17
目的针对促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver-1,PRL-1)3’端非翻译区(3-untranslatedregion,3’UTR)构建PRL-1荧光素酶报告基因载体及突变体,为研究miR-339-5p在结肠癌中调控其靶基因PRL-1提供有效的工具。方法 PCR扩增包含PRL-1的3’UTR的DNA片段,克隆至荧光素酶载体psiCHECK-2,构建psiCHECK-2/PRL-13’UTR载体;经双酶切及测序鉴定后,对psiCHECK-2/PR........
RNA干扰载体的构建的实验流程 实验方法
sdplwill2021-09-16
我现在在做RNA干扰载体构建的连接反应，我将退火的目的片段与酶切后的载体片段（浓度很低）做了连接之后使用大肠杆菌DH5α进行转化，可是做了三次不同的连接反应，转化了三次都失败了，不知道什么原因？我考虑：（1）是不是连接反应体系有问题？（2）oligo的退火有问题？还是技术环节上有什么不足？希望大家能给予宝贵意见。.....
【求详细的基因表达载体的组成,····不好意思,少说了一些,是在...
纞丄微笑2021-09-15
基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，而基因表达载体的本质是DNA，组成元素有碳氢氧氮磷，其中氮在含氮碱基中，磷在磷酸基团中完整的表达载体必须包括：1、复制子,在细菌中扩增时所必须.2、启动子,目的基因在细菌或细胞中转录所必须,转录了才能翻译,是谓“表达”.3、原核筛选标记,细菌增菌所必须.4、真核筛选标记,如果是真核表达,就是必须的.5、多克隆位点,即酶切位点,插入目的片段的区域.6、其他所需构件,可视实验设计情况而选用现成载体或在载体上自行添加.另：表达的起始和终止,在目的基因上附带起始密........
基因敲除,请教大神(pk18mobsacB) 分子生物 干扰/敲除...
lijinglong1112021-09-14
我以后可能做放线菌的基因敲除，查了下，需要pK18mobsacB载体，求哪个大神实验室有，求助！可以有偿购买.....
.知道mrna序列，构建表达载体
wzm1991112706432021-09-13
已知mrna序列，找了cds，设计引物，一直跑不出来，不晓得那里出了问题，过来人帮忙下.....
CRISPR cas9基因敲除原理及其应用
yangwx8101202021-09-12
请教各位前辈，在我的课题中要建基因敲除打靶载体，如下：“长臂（末端具有SD序列）——loxP——SA——cassette1——polyA——loxP——SA——cassette2——polyA——短臂”像这样具有两个SA序列的打靶载体，在转录的时候，长臂末端SD序列会从哪个SA开始继续转录？有没有可能形成“长臂——cassette2”的转录本；即在转录时，跳过第一个SA，由第二个SA开始转录？如何避免？刚涉及这个领域，望各位前辈多多指教。万分感激！.....
在基因工程中常用做基因载体的是（ ）A. 细菌B. 真菌C. 病毒D. 动物_...
2021-09-11
质粒和噬菌体载体只能在细菌中繁殖，不能满足真核DNA重组需要。感染动物的病毒可改造用作动物细胞的载体。由于动物细胞的培养和操作较复杂、花费也较多，因而病毒载体构建时一般都把细菌质粒复制起始序列放置其中。使载体及其携带的外来序列能方便地在细菌中繁殖和克隆，然后再引入真核细胞。目前病毒载体常用者有改造来自猴肾病毒SV40（Simian Virus 40）、逆转录病毒和昆虫杆状病毒等，使用这些病毒载体的目的多为将目的基因或序列放入动物细胞中表达或试验其功能、或作基因治疗等（见后）。人基因组十分庞大，约........
在基因工程中用来构建基因表达载体需要的工具是（ ）
2021-09-10
大致需要以下几种东西：（1）原始表达载体，用以把目的基因连上去；（2）扩增目的基因的模板；（3）核酸内切酶，用于切割载体和目的基因；（4）连接酶，用于连接目的基因和载体；（5）大肠杆菌感受态，用于转化筛选阳性克隆。.....
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