2021-07-29稳转细胞株总是拿不到，怎么办？

可以用嘌呤霉素或者G418筛选看看，我这边筛选稳转细胞都是这样做的。

zhaoyigezidaiti可以用嘌呤霉素或者G418筛选看看，我这边筛选稳转细胞都是这样做的。我是用的嘌呤霉素，你们是怎样筛选的流程呢？

一般筛稳转都是一个月左右的，根据细胞的耐药情况，可以2天加一次或者一天加一次，换液观察，知道全部出现荧光即可。

展开引用Chen0225转染或PEI转染293的细胞后，一种方式加筛选压力（puromycinorhygromycin），筛选后少量细胞存活，扩大培养后，发现没有阳性，另一种方式，转染后分单克隆，扩大培养后也检测不到阳性。原本转染24-72小时转染效率至少在50%，大部分可能是瞬转，但不会一个都没有整合到基因组吧，以前我用这种方法筛选成功过几株稳转株，但是最近一段时间都失败，有遇到类似情况的吗？想和大家交流交流......这种方法拿到稳转株的可能性太小了，而且耗时。这种方式需要一直加药进行维持。慢病毒比较快。成功率也高。PEI拿到稳转株这个可能性太小了。

目前使用lip2000和嘌呤霉素做稳转株，做成了一次，初次筛选的时候原液ELISA检测表达量0.1~0.3这样。纯化筛选3次后原液稀释100倍后检测表达量超过ELISA检测上限，数值不准，有2.6那么高。就是不知道是不是表达量太高了毒害细胞还是筛太久了导致细胞老化，好多区域产生了融合症状，就像被合胞病毒感染了一样。