2017-06-09关于稳转细胞株培养出现的问题

这两个细胞总的来说是很好培养的，考虑到试剂也是细胞来源处提供的，收到细胞状态也没问题，那问题基本就是操作不过关了，这个只能靠多练习多思考。

Ucell这两个细胞总的来说是很好培养的，考虑到试剂也是细胞来源处提供的，收到细胞状态也没问题，那问题基本就是操作不过关了，这个只能靠多练习多思考。同时也在养着好几株细胞，有hela和hepg2，没有做稳转的，养着都没有问题，状态很好。在培养稳转的这几株细胞的时候，比平时操作还要注意，但是还是出现问题了。我想问下，除了操作问题之外，还可能有哪些问题呢？

展开引用大悦nju同时也在养着好几株细胞，有hela和hepg2，没有做稳转的，养着都没有问题，状态很好。在培养稳转的这几株细胞的时候，比平时操作还要注意，但是还是出现问题了。我想问下，除了操作问题之外，还可能有哪些问题呢？......如果同时培养的野生型细胞没有问题，那可能是稳转株干扰或者过表达的基因对细胞生长有一定影响，这种情况建议你联系你委托构建的单位，问问他们培养过程中有没什么特别要注意的地方。

Ucell如果同时培养的野生型细胞没有问题，那可能是稳转株干扰或者过表达的基因对细胞生长有一定影响，这种情况建议你联系你委托构建的单位，问问他们培养过程中有没什么特别要注意的地方。好的。谢谢大神。我一直怀疑是两处培养条件有差别，导致细胞培养出现问题，委托单位说他们那边细胞培养状态很好，但是一到我们这边培养就出现问题。另外就是昨晚我37℃细胞消化3min后少部分脱壁，大部分仍贴壁，延长消化时间1min后，又室温放置消化1min左右，基本脱壁后加入培养基终止消化的，我想问下，有可能是消化这步影响的么？我们这边同时培养的野生型细胞消化时间在2-3min，委托单位那边说构建的稳转株他们的消化时间是2-3min。谢谢大神指教！

展开引用大悦nju好的。谢谢大神。我一直怀疑是两处培养条件有差别，导致细胞培养出现问题，委托单位说他们那边细胞培养状态很好，但是一到我们这边培养就出现问题。另外就是昨晚我37℃细胞消化3min后少部分脱壁，大部分仍贴壁，延长消化时间1min后，又室温放置消化1min左右，基本脱壁后加入培养基终止消化的，我想问下，有可能是消化这步影响的么？我们这边同时培养的野生型细胞消化时间在2-3min，委托单位那边说构建的稳转株他们的消化时间是2-3min。谢谢大神指教！......消化时间不宜过长，过长会影响生长状态

展开引用大悦nju好的。谢谢大神。我一直怀疑是两处培养条件有差别，导致细胞培养出现问题，委托单位说他们那边细胞培养状态很好，但是一到我们这边培养就出现问题。另外就是昨晚我37℃细胞消化3min后少部分脱壁，大部分仍贴壁，延长消化时间1min后，又室温放置消化1min左右，基本脱壁后加入培养基终止消化的，我想问下，有可能是消化这步影响的么？我们这边同时培养的野生型细胞消化时间在2-3min，委托单位那边说构建的稳转株他们的消化时间是2-3min。谢谢大神指教！......这两株细胞的野生型我这边养的时候消化时间也在2min左右，你的稳转株消化近5min不太正常，如果委托单位也是2-3min，那消化这步肯定哪有问题，贴壁细胞的消化对细胞状态影响是很大的。

Ucell这两株细胞的野生型我这边养的时候消化时间也在2min左右，你的稳转株消化近5min不太正常，如果委托单位也是2-3min，那消化这步肯定哪有问题，贴壁细胞的消化对细胞状态影响是很大的。好的，谢谢大神！

胰酶覆盖完细胞后吸掉，不然消化完细胞后离心丢掉上清

胰酶，胰酶的原因吧

稳转株本来就是筛选出的单克隆，状态与野生型细胞比状态是脆弱一些。刚拿回来的时候尽量不要去消化，培养瓶里原带的培养基可以收集起来，每次换液先用原来带的培养基。细胞在培养箱里适应2-3天。随后传代消化时候尽量不要时间过长，不要等细胞浮起来时候再终止消化。还有终止消化的时候吹打细胞不要过于用力，轻轻吹打即可。终止的血清和胰酶一定要离心，离心！将胰酶去掉，不然很影响细胞状态。供参考

消化后胰酶要弃掉然后换新的培养瓶一直用以前的培养瓶有长老的细胞消化不下来的