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Q24、TaqManMutationDetectionAssays有何用途?
A:该产品采用castPCR技术(CompetitiveAllele-SpecificTaqManPCR,竞争性等位基因特异TaqManPCR)。利用经过修饰的等位基因特异性的引物进行突变基因型的检测,同时采用MGB阻断物抑制野生型基因背景。该技术具有高度的特异性,可从大量正常拷贝的背景中检测出极微量突变。
Q25、TaqManMutationDetectionAssays应该配套哪种mastermix?
A:推荐使用TaqManGenotypingMasterMix,其他类型的mastermix未经过测试。
Q26、TaqManMutationDetectionAssays适用于哪些样品类型,对样品起始量有何要求?
A:样品类型以及起始量要求参看如下:
Q27、TaqManMutationDetectionAssays产品适用于哪些型号的定量PCR仪?是否适用于其他品牌的仪器?
A:
QuantStudio3,5,6,7也可以使用。
由于后续数据分析需要使用专门软件,我们不建议在其他仪器上使用。
Q28、TaqManMutationDetectionAssays反应次数是多少?
A:该类型Assays仅有一种包装。针对384孔板10微升体系时,每孔需加Assay1微升,可以作150次反应;针对96/Fast96孔板20微升体系时,每孔需加Assay2微升,可以作75次反应。
Q29、TaqManMutationDetectionAssays的数据如何分析?
A:如果使用AB品牌定量PCR仪器,数据分析可以使用MutationDetectorSoftware,下载网址:https://www.Thermofisher.com/cn/zh/home/technical-resources/software-downloads/mutation-detector-software.html
Q30、TaqManMutationDetectionAssays产品该如何选择对照?
A:可以在AssaySearch界面中点击“Requiredreferenceassays”进行选择,如下图。
针对部分基因和位点,我们同时提供wildtypeassay和genereferenceassay,两者均可以作为对照使用,优先推荐wildtypeassay。而对于没有提供wildtypeassay的基因和位点,可以选择genereferenceassay作为对照。
Q31、Genereferenceassay和IPC有什么区别?如何使用?
A:Genereferenceassay(FAM-MGB标记)扩增该基因的非突变区域,以计算突变比例,并排除模板问题造成的无法扩增,与MutationDetectionAssay同时反应,但加在不同反应孔中;IPC(VIC-TAMRA标记)是一个阳性内对照,能与任何MutationDetectionAssay产生阳性结果,用以区分阴性结果和PCR失败,与MutationDetectionAssay加在同一反应孔中。
Q32、使用TaqManMutationDetectionAssays进行实验时,应选择何种实验反应类型?
A:选择AbsoluteQuantitationorQuantitation–StandardCurve。
Q&A TaqManCopyNumberAssays相关问题 Q33、TaqManCopyNumberAssays包括哪些组分? A:包括上、下游引物及FAM标记的MGB探针,同时还需要购买ReferenceAssay。ReferenceAssay为VIC标记的TAMRA探针。 Q34、TaqManCopyNumberAssays的反应次数是多少? A:参见下表。384孔板为10微升体系,96/Fast96孔板为20微升体系。 Q35、目前针对哪些物种,我们有预设计好的TaqManCopyNumberAssays? A:人和小鼠。 Q36、TaqManCopyNumberAssays对仪器有何要求? A:目前AB品牌的定量PCR仪,除了StepOne仪器外,其他型号的仪器均可以进行TaqmanCopyNumberAssays的实验。由于涉及到荧光采集及后续数据分析的问题,不建议在其他品牌的定量PCR上进行该类型实验。 Q37、TaqManCopyNumberAssays应该配套哪种MasterMix? A:优先推荐TaqPath™ProAmp™MasterMix或TaqManGenotypingMasterMix。TaqManUniversalPCRMasterMix和TaqManGTXpress™MasterMix也可以使用。 Q38、TaqManCopyNumberAssays实验是否一定要有已知拷贝数的阳性对照样品? A:非必需,在CopyCaller软件上可以使用nocalibrationsamplemethod进行分析。 Q39、TaqManCopyNumberAssays实验中,样品需要做几次重复? A:建议做4次重复。 Q40、TaqManCopyNumberAssays实验是否可以运行快速模式? A:不建议运行快速模式,建议运行标准模式。 Q41、TaqManCopyNumberAssays数据结果如何分析? A:如果使用AB品牌定量PCR仪器,可以使用CopyCaller软件进行数据分析,软件下载网址:https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/technical-resources/software-downloads/copycaller-software.html
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