一.样本采集和储存

1、采便盒采集新鲜粪便样本。固体约20g或稀便约20ml（约粪便盒的三分之一）

2、5天内4℃保存，5天至1月内-20℃保存，1月以上-70℃长时间保存

二.提取程序

1、定量管螺纹一端插入粪便，使螺纹填满，插入定量管中并拧紧，确保螺纹被填满，（约13mg粪便）

2、若样本为水样，直接用移液枪吸取13ul（13mg）到定量管，若样本为粘稠的胶状便，建议采用电子天平称量定量

3、拧开定量管另一端，加入650ul样本提取液（1:50倍稀释），涡旋震荡5-10min，直到螺纹上粪便样本完全溶解

4、将震荡好的萃取液从滤头处挤出上清，滴入1.5mlEP管内，取10ul加入到1500ul孵育缓冲液（150倍稀释）

三.ELISA步骤

1、将试剂盒平衡至室温

2、将96孔板清洗2遍，甩干（注意：洗后不能放置时间过长；可不用洗板操作）

3、分别吸取100ul稀释后的样本、标准品及质控品

4、用封膜封板，置于水平摇床，18-28°C孵育30-60分钟，400转/分钟

5、清洗4遍

6、每孔均加入100ul酶结合物

7、用封膜封板，置于水平摇床上，18-28°C孵育30-60分钟，400转/分钟

8、清洗5遍，甩干

9、每孔均加入100ulTMB底物液

10、用封膜封板，置于水平摇床上，避光，18-28°C，孵育15分钟，400转/分钟

11、每孔均加入100ul终止液终止

12、用酶标仪在450nm处读数（5分钟内）

13、x轴使用浓度值30,90,300,900,1800ug/g，Y轴使用OD值，使用四参数拟合标曲。根据Y值计算获得样本X值