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| 实验材料 | DNA 试剂、试剂盒 | 生物素磷酸酶 仪器、耗材 | 紫外灯离心机
实验步骤 | 1. 用夹子固定已转印的尼龙膜的边角于一小片干的吸水纸上,样品面朝上,放进温箱内12~80℃放15~30min或温室晾干过夜。 2. 将带核酸的面朝上暴露于紫外灯下,用最适的时间交联。 3. 用生物素探针与膜杂交,用适当强度的洗液洗涤。 4. 杂交后、将膜置于杂交袋中。 5. 封口,在一个角留有一小孔便于加入和排出液体。 6. 加入1体积的封阻液、室温作1min轻微摇动、倒干溶液。 7. 加入1mg/ml链亲和素至1体积的封阻液至终浓度为1μg/ml,在杂交袋中室温温育4min,轻微摇动,倒干溶液。 8. 加入10体积诜液I,室温洗膜4min轻微摇动,倒干溶液,重复1次。 9. 加入生物素酰化碱性磷酸酶至1体积的封阻液,室温作用4min轻微摇动、倒干溶液。 10. 用10体积洗液I洗膜2次,同步骤8。 11. 用0.5体积底物稀释液稀释化学发光底物,在杂交袋中室温作用4min轻微摇动,打开杂交袋,尽可能倒干溶液。 12. 压平杂交袋上的折皱,重新封口,结合核酸的一面向上,用一张X光片压好,在暗盒内曝光10~20min。
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