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测得值1.8左右,DNA浓度10-20ng/ul,修饰后测得DNA浓度20-30ng/ul,并且OD260/OD280
测得值大于3.0,考虑DNA碎裂,单核苷酸形成。
各位对下述问题有何建议:
1.怎样防止DNA碎裂(亚硫酸盐处理试验期间,DNA保护buffer有效)。
2.什么公司的重亚硫酸盐修饰试剂盒处理后的DNA较稳定,可以继续后续试验。
谢谢!
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回复:时间:2021-07-24
1、DNA被亚硫酸氢盐修饰后会成为单链,修饰以后的DNA肯定会比修饰之前的脆弱很多,但是不会影响你后面的试验,比如msp或者bsp。2、目前的亚硫酸氢盐修饰的kit应该都很成熟,不会有多大问题。我之前用过Methylamp? DNA Modification Kit(Base Catalog # P-1001),很好用啊。
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回复:时间:2021-08-01
展开引用waterf21本人甲基化菜鸟,最近用的EpiTectBisulfiteKit(Qiagen)重亚硫酸盐试剂盒,修饰前OD260/OD280测得值1.8左右,DNA浓度10-20ng/ul,修饰后测得DNA浓度20-30ng/ul,并且OD260/OD280测得值大于3.0,考虑DNA碎裂,单核苷酸形成。各位对下述问题有何建议:1.怎样防止DNA碎裂(亚硫酸盐处理试验期间,DNA保护buffer有效)。2.什么公司的重亚硫酸盐修饰试剂盒处理后的DNA较稳定,可以继续后续试验。谢谢!......你好,想请教你几个问题:1、用EpiTectBisulfiteKit的最后一步,使用EB洗脱的,如果我想稀释,还是用EB吗?如果都用EN,那些EB试剂够用吗?2、修饰后浓度,吸光度值是不是都不准确了?那怎么确定浓度呢?吸光度值又能代表些什么呢?谢谢
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回复:时间:2021-07-26
展开引用zhouxiaoyu19841、DNA被亚硫酸氢盐修饰后会成为单链,修饰以后的DNA肯定会比修饰之前的脆弱很多,但是不会影响你后面的试验,比如msp或者bsp。2、目前的亚硫酸氢盐修饰的kit应该都很成熟,不会有多大问题。我之前用过Methylamp?DNAModificationKit(BaseCatalog#P-1001),很好用啊。......真幸福啊,还有试剂盒用,我们都是自己配溶液。。
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回复:时间:2021-08-02
展开引用zhouxiaoyu19841、DNA被亚硫酸氢盐修饰后会成为单链,修饰以后的DNA肯定会比修饰之前的脆弱很多,但是不会影响你后面的试验,比如msp或者bsp。2、目前的亚硫酸氢盐修饰的kit应该都很成熟,不会有多大问题。我之前用过Methylamp?DNAModificationKit(BaseCatalog#P-1001),很好用啊。......您好,我目前也在做MSP,修饰后的纯度只有1.3了,您得意思是不是说这个纯度不影响之后的扩增呢
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回复:时间:2021-07-30
waterf21个人认为是不影响的,主要还是在于引物和酶。您好,想再请教您一个问题。同一基因由不同人设计的甲基化引物,导致P出来的基因片段大小不同是对的吗
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