2021-07-29【求助】甲基化修饰后的DNA浓度？

我的体会是不做浓度测定，毕竟修饰后的dna量少,太宝贵了，但是取3ul左右做一下电泳看有没有dna存在就行了，只要有dna,一般就能扩出结果，但是由于不可避免地降解，电泳结果多为smeal带，不影响后面试验。祝好运。

我的体会是不做浓度测定，毕竟修饰后的dna量少,太宝贵了，但是取3ul左右做一下电泳看有没有dna存在就行了，只要有dna,一般就能扩出结果，但是由于不可避免地降解，电泳结果多为smeal带。我认为在很多做甲基化检测的文献中，一个最常见的缺陷就是不测模板的浓度。当然这确实与MSP得到的模板较少，而且浓度较低有关，如用一般仪器测定会浪费很多样品，但这不能成为可以省去这一步骤的理由，而且现在已经有只用1-2ul就可能测浓度的紫外-可见分光光度计了。楼主得到的25ng/ul的浓度是个很正常的值，在我们实验室所做的100多例样品中，很多也都在这个值附近。但是也常有过高或极低的浓度值出现，二者可相差几十倍。这是因为肿瘤样品由于保存时间不同、组织坏死程度各异，所以其基因组的含量和完整程度也不尽相同，在这种情况下如果还用相同体积的模板做PCR，可想而知会有什么样的结果。而且目前MSP作为一种可能成为肿瘤早期诊断的方法，就可要避免这些可能造成假阴性或假阳性结果的因素了。

请问bioyang老师：我从血清中提取DNA浓度只有3-7ug/ml,再经过试剂盒修饰，余下的再作MSP可以吗？我的阳性对照跑出过条带，其他始终未见，是DNA模板量不够吗？

qichong不必客气。我不知道你的DNA浓度是如何测得，但如果我测得的浓度也有这么低，我会怀疑这个值的准确性的。下面这张图是用我们仪器测DNA浓度的图谱，仪器显示值分别是4.0ug/ml和5.1ug/ml，和你的差不多。但如果仔细分析一下这两个图你就能发现，这两个所谓的浓度值是没法用的，因为它们根本不准确，原因就不必多说了。所以对于这样的样品，我一般只好放弃了。

TO:qichong你好!我目前还在摸索从血清中提取游离dna的方法,看到你的留言,兴奋不已,能把你的提取血清DNA的方法和我共享一下吗?谢谢!我的邮箱:yunmingkong@yahoo.com.cn

我做了修饰并纯化后,跑电泳没有结果,我就没有信心做PCR了,但我没有测定浓度,是否需要测一下浓度?修饰后的DNA-20度能保存多长时间??

不好意思，最近忙试验，才看到各位给我的留言，我用的是QIAampBloodminiKit,修饰后的DNA在-20度下最长可保存8周

qichong不好意思，最近忙试验，才看到各位给我的留言，我用的是QIAampBloodminiKit,修饰后的DNA在-20度下最长可保存8周修饰后我补测了一下浓度，最高才10ng/ul。我还能继续做PCR吗？另外一个问题请教：MSP的1xPCRbuffer，是先配成几x的储存液呢，用时稀释到1x？还是直接把1x的buffer加进去，加到需要的体积？我简直太菜了，请您指教！

tomxy01:以我的经验,10ng/ul能pcr出来bytheway,whynothaveatrybeforeasking?

谢谢各位了，经过摸索，回收率有所提高，大概到了90%左右了，这样的话，msp就应该可以了！

请问Bioyang老师。我现在在做DNA甲基化修饰实验，我用的是Qiagen的试剂盒，请问修饰后跑胶能看到DNA条带吗？（我做了未发现条带）并且PCR后跑胶也未发现条带。其中，我加的DNA分别为5ul、10ul的量。非常感谢。我的QQ375720785.盼回复，谢谢！

请问danbai，你是怎么提高回收率的？

请问各位战友，我做甲基化时，无论实验组，对照组，和水都出现条带，能分享一下经验吗，是不是修饰出了问题？