1. 在直径82mmLB平极上倒入含200μl宿主菌的3ml0.7%顶层琼脂糖，放置10min。

 

2. 通过放射自显影胶片上的杂交斑点确定阳性噬斑在原平板上的位置，用牙签轻轻插入斑中。

3. 然后接种到步骤1制备的次级平板的顶层琼脂糖中，此牙签在平板上接连插30~40下。

 

4. 或用吸管插入阳性噬斑的位置，取一小块环形琼脂糖转入1mlSM中。

5. 加入1滴氯仿，放置1~2h，滴定，制备3~6个平板，每个平板的噬斑数应小于500个。

6. 次级平板置37℃过夜培养，将噬菌斑影印到硝酸纤维素滤膜上。

7. 再依次处理、杂交、洗膜和曝光，然后在次级平板上找出对应的阳性噬菌斑。

9. 对每个克隆，将牙签插入杂交信号最强的噬菌斑中，并在1mlSM中放置5min。

10. 将1μl噬菌体贮存液。1μl和10μl1：100稀释液铺三级平板。

11. 按以上步骤筛选第三级平板上的噬斑。

12. 重复这一纯化过程，直至获得纯的噬斑为止，并将纯的噬菌体保存在SM中。