1.4μm石蜡切片58℃烤片4h，切片常规脱蜡至水，PBS洗3min×3次。

2.蛋白酶消化或AR（组织抗原的暴露或抗原的修复，此步视情况而定）。

3.0.3％H₂O₂处理切片20min（室温），PBS洗3min×2次。

4.3％正常动物血清处理切片30min（室温），吸去多余血清，不洗。

5.适当稀释的特异性一抗孵育（4℃过夜或37℃60min），PBS洗3min×3次。

6.滴加桥抗体（二抗），37℃孵育30min，PBS洗3min×3次。

7.适当稀释的PAP复合物（要求与特异性一抗同一种属）37℃孵育30min。

8.PBS洗3min×3次。

9.适当稀释的生物素化羊抗兔或抗鼠二抗（根据PAP复合物种属而选择不同的二抗）37℃孵育30min，PBS洗3min×3次。

10.适当稀释ABC复合物37℃孵育30min，PBS洗3min×3次。

11.0.04％DAB-0.03％H₂O₂显色8～12min。

12.水洗、复染、脱水、树胶封片，观察结果。