Day-1:PassEScellsatnormaldensityongelatinizedplatetofreethecultureofcontaminationfibroblastcells.

______________

Day1:Trypsinizedthecellsasfornormalpassaginguntilthecoloniesliftoff.Trytokeepthelooselyconnectedclumpsofcellstogetherbygentlehandling.Thendirectlyplatethecells1:3intobacterialgradePetridishesinLIFfreeEScellmedium.

Day3:Aspiratethemediumcarefully.Avoidsuckinguptoomanyoftheaggregates.Thenaddnewmedium.

Day7:Changethemedium

Day9:Changethemedium

Day11:Changethemedium

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