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实验材料	寡核苷酸
试剂、试剂盒	LBSDSEDTATMAC
仪器、耗材	水浴锅离心机培养箱尼龙膜
实验步骤	1. 按“在氯化钠/柠檬酸钠中杂交”介绍的方法处理已影印细菌菌落的滤膜。 2. 按下列方法制备带扩增噬斑的滤膜 （1）从文库中以渐减密度〔15000~8000噬斑/150mm平板）的方式将噬菌体铺在琼脂糖平板上。 （2）37℃培养至长出可见的噬斑。 （3）将噬斑影印到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜后，滤膜移至预热的LB琼脂糖平板上，37℃培养5~12h（转印后冷室保存主平板）。 （4）将影印到膜上的噬菌体DNA变性并使之结合到滤膜上。   3. 转印细菌菌落的滤膜按“在氯化钠/柠檬酸钠中杂交”的步骤1洗膜，然后将滤膜浸入50℃2×SSC/0.5%SDS/50mmol/lEDTA，pH8.0溶液中洗涤，尽可能冼去滤膜上影印的细菌残渣，然后用同洋的溶液再洗1遍。   4. 按每张滤膜5~10ml预温的TMAC杂交液量，在15cm玻璃水晶盘中可移入多达30张的滤膜，用塑料保鲜膜将玻璃盘封好。 5. 在杂交温度下预杂交1~2h。杂交温度和洗膜温度均应比解链温度低5~10℃。   6. 预杂交后，将滤膜转移到一个装满新鲜、预热的TMAC杂交液的杂交容器中。 7. 并按毎毫升杂交液加入1×106~2×106cpm35P标记的寡核苷酸探针，于适当的温度下温育40~60h。   8. 室温下每张滤膜先用5~10mlTMAC洗液洗涤，然后分别将滤膜转移到200~250ml新鲜的TMAC洗液中，轻轻振荡洗涤15min。   9. 换上等体枳预热的TMAC冼膜液，在适当的洗膜温度下温育1h。 10. 再用等体积的2×SSC/0.1%SDS洗膜液在室温下洗膜，共3次，每次约10min，以去除TMAC。 11. 最后按“在氯化钠/柠檬酸钠中杂交”进行放射自显影。