问：如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？答：在有些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5个100-mm的SD/–Trp平板。在30℃下温浴，直至平板上的克隆互相粘在一起。用5ml0.5XYPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一管中。接着就使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。问：我的诱饵蛋白能直接激活报告基因的表达，该如何处理？答：该蛋白很可能有转录激活域，是个转录因子。这可以通过基因重组切掉转录激活域，然后重新检测其是否自激活。但重组也有可能破坏蛋白之间的互作。

问：转化效率太低，怎么办？答：1.检测一下DNA的纯度，如果可以的话，重新用乙醇纯化。2.DNA-BD/诱饵蛋白很可能是有毒的。3.不适当的培养基，重新配制培养基，并做对照转化。4.检测pGBT9对照载体的转化效率，放置于SD/–Trp平板上，转化效率应该在1x10⁵colonies/mgDNA以上。问：杂交效率不高，该如何处理？答：在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当你对诱饵菌株进行液体培养过夜时，应挑选大的，新鲜的克隆进行培养。经过离心和重悬后，使用血球计对细胞进行计数。密度应该在1x10⁹/ml。一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻毒性，同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平较低的载体。也可以在琼脂平板或滤膜上进行杂交。但同时必须作杂交对照实验。

================  蚂蚁淘在线  ================

免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容

版权声明：未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘在线”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。