2021-08-09酵母双杂交的局限性

酵母双杂交系统析蛋白-蛋白间相互作用效快速 面应用 仍存些局限性⑴双杂交系统析蛋白间相互作用定位于细胞核内 许蛋白间相互作用依赖于翻译加工糖基化、二硫键形等 些反应核内进行另外些蛋白确折叠功能赖于其非酵母蛋白辅助 限制某些细胞外蛋白细胞膜受体蛋白等研究⑵酵母双杂交系统重要问题假阳性由于某些蛋白本身具激转录功能或酵母表达发挥转录激作用 使DNA结合结构域杂交蛋白特异激结构域情况激转录另外某些蛋白表面含种蛋白质低亲力区域 能与其蛋白形稳定复合物 引起报告基表达 产假阳性结许研究者双杂交系统进行改进发展例采用假阳性显示析双筛选系统减少假阳性发；发展哺乳物双杂交系统更研究蛋白间相互作用其双筛选系统用二种同报告基（用lacZHIS3）优势vii：⑴ 用同启表达位于酵母二染色体报告基 明显减少假阳性⑵ 通营养型筛选增强筛选能力 尤其适用于较库容量选蛋白较少情况筛选哺乳物双杂交系统Ⅷ种基水平重建转录功能基础体内析系统种兴趣蛋白与Gal4--DNA结合结构域构融合蛋白另种蛋白与单纯疱疹病毒VP16蛋白激结构域融合蛋白表达表达些融合蛋白载体与报道载体（CAT）共同转染哺乳物细胞系报道质粒含Gal4结合位点游cat基假两融合蛋白相互作用则cat报道基表达水平明显增高用系统证实P53蛋白与T抗原相互作用 酵母双杂交系统相同结且较酵母双杂交系统更快速转染48h内结并且哺乳物细胞能更模仿体内蛋白-蛋白相互作用哺乳物双杂交系统作酵母双杂交系统辅助手段图" class="ikqb_img_alink">