通过DUALmembrane酵母双杂交系统筛选APP互作蛋白

阿尔茨海默症（老年痴呆症，AD）是最常见的神经系统退行性疾病。随着人口老龄化的加重，该病越来越受到重视。然而，目前还没有能够取得根本性治疗的药物。发病机制尚不可知，其中淀粉样前体蛋白(Amyloidprecursorprotein;APP)水解产物Amyloidβ(Aβ)蛋白为阿尔茨海默症发病首要原因的假说占主导地位。在细胞中APP通过信号传导，参与多个生物过程，研究其信号调节作用对多种生理疾病都有重要意义。

本研究中，以APP作为诱饵与Cub载体相连，猎物基因与NubG载体相连构成cDNA文库，通过分离泛素系统筛选互作蛋白。

实验材料：

酵母菌株：NMY51

诱饵载体：pBT3-C

cDNA文库：HumanBraincDNALibrary

实验方法：

DUALmembrane酵母双杂交；免疫共沉淀

实验结果：

1.APP阳性验证及筛选条件

根据实验要求，文中选择了SD-leu/trp/his/ade(7.5mM)作为APP筛选条件。

2.cDNA文库转化和互作子筛选

共筛选到15个阳性克隆见下图，值得注意的是，实验中在共转和筛选后发现有8个白斑在β-半乳糖苷酶检测中变蓝，说明其也与APP相互作用，作为候选的APP互作子测序后比对结果见下表。

3.在哺乳动物中STAU1与APP互作

通过免疫共沉淀技术验证了STAU1与APP在Hek293T细胞中相互作用。

4.STAU1降低了Hek293T细胞的存活率

免疫共沉淀实验中发现当STAU1转入细胞Hek293T中后，细胞存活率下降，进一步研究发现结果如下表。研究说明了APP和SATU1均能够降低哺乳类细胞存活率，推测APP可能参与RNA降解来降低细胞存活。

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参考文献：YuY,LiY,ZhangY.ScreeningofAPPinteractionproteinsbyDUALmembraneyeasttwo-hybridsystem.[J].InternationalJournalofClinical&ExperimentalPathology,2015,8(3):2802-8.