Plasmidisolationfromyeast

(seeClontechYPH,p31)

Pickcoloniesinto0.5mlofSD-Leu(orotherappropriateSDmedium)

Vortexfor1min

LeavetogrowO/Nfor18-24hat30°C,230-250rpm(bestin5mlbijou)

Spinyeastcultureat13,000rpmfor5min(microfuge)

PouroffsupernatantcarefullyandresUSPendthepelletinresidualliquid(~50µl)

Add10µlLyticase(SigmaL2524at5Units/µlinTE;aliquotsstoredinat-20°C)

Mixthoroughlybyvortexing/pipetting

Incubate1hat37°C,250rpm

Add10µlof20%SDSandvortexfor1min

Freezesamplesat-20°C

Thaw

Vortex

StartQiagenminiprepprotocolbyadding180µlofBufferP1toobtainafinalvolumeof250µl

Add250µlBufferP2

Etc..followQIAGENprotocol

EluteDNAin30µlofH2O

Use20µlofelutedDNAtotransform200µlcompetentXL1-Blues

PlateonLB/Amp,growupfromcoloniesandminiprep.

Alternatively:Inoculatedirectto5mlLB/AmpO/NandontoLB/Ampplates50:50.IsolateplasmidusingQIAGENminipreps.

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