簇生成和测序试剂
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ThisProtocolallowsforTRAFOwithanyYeastcellsource
Whenjustafewtransformantsaresufficient,suchasthetransformationofatestplasmidoraGAL4BDfusionplasmid,thefollowingprotocolcanbeused.ThisprocedureisveryflexIBLeandcanbeappliedtoyeastcellsfromanumberofdifferentsources;however,forbestresults,usecellsfromafreshlygrownplate.
RapidTransformationProtocol
Day11.Inoculatetheyeaststrainina2cm2patchontoYPADagar(YPD12supplementedwith100mgadeninehemisulphateperliter)andincubateovernightat30C.Alternatively,theyeaststraincanbeinoculatedinto5mlofliquidmedium(2xYPADorSCselectionmediumandincubatedonashakerat30Cand200rpm.
Day21.HeatatubeofcarrierDNAinaboilingwaterbathfor5minandthenchillinice/water.2.Scrapea50mlblobofyeastfromtheYPADplateandsUSPendthecellsin1mlofsterilewaterina1.5mlmicrocentrifugetube.Thesuspensionwillcontainabout5x108cells.Cellsgrownovernightin2xYPADbrothwillreachatiterbetween1and2x108/ml;thetiterinSCmediumwillbeabout5x107/ml.Harvest2mlofaYPADcultureand5mlofaSCculture.Note:cellsinlogphasegrowthonagarorinliquidmediumwilltransformwithhighefficiency.3.Pelletthecellsattopspeedinamicrocentrifugefor30secanddiscardthesupernatant.4.*AddthefollowingcomponentsoftheTransformationMixtothecellpelletintheorderlisted:
| 1.PEG350050%w/v | |
| 2.LiAc1.0M | |
| 3.BoiledSS-CarrierDNA(2mg/ml) | |
| 4.PlasmidDNA(0.1to1µg)pluswater | |
| TotalVolume |
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