2021-08-14【求助】关于全长cDNA文库构建的须知及难点

你建库是偏重全长还是多拿克隆呢？

构建测序文库一般用clontechsmart试剂盒，表达文库一般用strategene的试剂盒。生手建库会比较费劲，要有思想准备。找公司帮助构建或许是个不错的选择，省时省力，花费也不会很多。需要这方面的实验服务，可以与我联系。

谢谢指教:)

我是新手，从没做过分子试验也担心做不好现在RNA提取还没过关呢，真是急人啊！

RNA的提取关键就是避免降解的问题。苔藓的RNA提取，你使用的是什么试剂盒呀？实验室的环境、操作时要戴手套口罩等、所使用的器皿都要注意避免RNase的污染。从新鲜材料中获得RNA后，最好立刻做反转录和合成双链，这样获得双链CDNA后，就安全多了。然后纯化的过程也要注意，免得损失过多，也会对后续实验造成不良后果。

还要看看合格全长CDNA文库质量标准库容插入子长度文库全长率冗余度重组率

目前没有很好的全长文库构建试剂盒的，SMART方法缺点多多，不建议使用，可以使用高碘酸钠氧化法，不过自己做需要长时间的经验积累，不好做的，建议找公司做，上海海科生物就做的蛮好的，我在那里做过几个。价格也不贵。

你好，朋友。我在构建CDNA文库，遇到很大麻烦。请问可否告知邮箱，我可以具体咨询一下你吗？感激不尽了。