1.准备安瓿管。市售的安瓿有直管式的，也有底部为球形的球式安瓿，也可选用中性硬质玻璃自制安瓿管。安瓿管清洁后，将标有病毒的标签放人安瓿管内，高压灭菌后备用。

2.制备保护剂。冻于菌种的保护剂种类很多，常用脱脂牛奶，可配成20%乳液，分装，高压灭菌，并作无菌试验。

3.制备病毒悬液。吸取3ml无菌牛奶加入毒种，轻轻摇动，再用手搓动试管，制成均匀的病毒悬液。

4.分装及预冻。用无菌的长颈滴管将病毒悬液分装于安瓬管底部，每管装0.2ml。将安瓬管上端烧熔成细颈，将安瓬整个浸入装有干冰和95%乙醇的预冻槽内，槽内温度约为-50℃~-40℃,可使悬液冻结成固体。

5.真空干燥。完成预冻后，开动真空泵抽气，气压降至133.3kPa以下，维持冻结剂可于4h后移去，继续于室温中抽气，达到完全干燥。

6.封管。待毒种完全干燥后即从干燥缸内取出安瓿瓶，置于抽气管上抽成真空，约需3~10min。用高频真空检测仪检查后，置4℃冰箱保存。