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question 【求助】有没有人用过NEB的IMPACT-TWIN纯化系统,效果如何?
最近想用此系统做蛋白纯化,但是看网上,好像这种系统的纯化效率不是很高,有没有人用过呢?有什么需要注意的地方呢?盼复,谢谢^_^
hhwang2000 2006-09-02
answer全部回答 (共 1 条)
  • 您好!感谢您对NEB产品感兴趣。IMPACT系统有其优势即纯化方法简单,可以不带入外源性的氨基酸。但是这个系统也有其缺点:1. 推荐使用的内切酶SapI对温度敏感,比较容易失活,使用时需要加大酶量。2. 因为不带有促进蛋白折叠的标签(如MBP),表达出可溶性蛋白的几率降低。而纯化系统不适合包涵体的纯化。3. 如果成功表达出融合蛋白,纯化时有一部分蛋白自剪切切不下来,这是因为和intein相连的氨基酸不是推荐的氨基酸,具体哪些氨基酸合适,哪些不合适您可以登录http://www.neb-china.com/cn/products/expression/IMPACT_Vectors.htm查看。目前国内也有表达很成功的例子。总之,蛋白表达是比较复杂的实验,您需要先分析您要表达的蛋白(如细胞定位、稀有密码子、疏水性等),再根据不同表达系统的特点选择相应的系统。当然如果有文献参考就比较好了。