QIAGENOneStepRT-PCRKit可对多种RNA模板进行简单、灵敏的一步式RT-PCR。

QIAGENOneStepRT-PCREnzymeMix含有为逆转录和PCR反应特别设计的酶。独特组合的Omniscript和Sensiscrip逆转录酶对RNA模板有高度亲和性，确保RNA逆转录的灵敏度达到1 pg到2 µg。逆转录完成后，升温至95°C，15分钟，活化HotStarTaqDNAPolymerase同时使逆转录酶失活。这种方法可减少引物二聚体等非特异性扩增产物的生成，并减少背景的影响，确保RT-PCR的高灵敏度和可重复性。

退火温度范围宽

引物的最佳退火温度取决于碱基对的组成（如A、T、G、C核苷酸的比例）、引物的浓度和反应的离子环境。QIAGENPCRBuffers含有K⁺和NH₄⁺，使用该缓冲液可在很宽的温度范围内增加特异性PCR产物的产量（参见"Increasedspecificprimerannealing"）。其原理是破坏非特异性结合的引物对，提供更加可靠的反应环境，减少繁琐的温度优化过程。相反，如使用仅含K⁺的PCR或一步式RT-PCR缓冲液，PCR最佳退火温度的范围较窄，可靠性较差。

QIAGENOneStepRT-PCRBuffer专为提高逆转录和PCR扩增的效率而设计。该缓冲液含有新型辅助剂，可防止逆转录酶对PCR扩增的抑制，而这是一步式RT-PCR中常见的问题。该缓冲液确保在较大的温度范围和Mg²⁺浓度范围内，引物与模板特异性结合，可对多种RNA模板进行高效的RT-PCR扩增。QIAGENOneStepRT-PCRKit含有Q-Solution，这是可修饰核酸熔解行为的新型辅助剂。Q-Solution可促进高GC含量或含较多二级结构的模板的逆转录和扩增。使用Q-Solution可简化复杂模板RT-PCR的优化过程。QIAGENOneStepRT-PCRKit含有您所需的所有试剂，可进行快速、简便的RT-PCR，用于多种灵敏的应用（见表）。

使用QIAGENOneStepRT-PCRKit可快速、简单的进行RT-PCR反应体系构建。无论是何种应用，即无论是病毒检测、分子诊断研究还是基因表达，您只需将所有试剂在一个离心管中混合即可开始PCR扩增（参见"OneStepRT-PCRprocedure"）。反应混合液含有逆转录和PCR反应所需的所有试剂，无需添加其他试剂即可开始反应（参见下表）。

QIAGENOneStepRT-PCRKit适用于RT-PCR分析，包括：

• 病毒检测
• 单细胞RT-PCR
• 基因表达分析