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链霉亲和素使用说明
链霉亲和素(streptavidin下称SA)是与亲和素(avidin下称AV)有相似生物学特性的一种蛋白质,是streptomycesavidinii菌的分泌物,其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似,等电点6.0,非特异性结合远比亲和素低。
中文名
链霉亲和素
外文名
streptavidin
类别
蛋白质
所属学科
生物学
SA是Streptomycesavicllrdi菌培养过程中的分泌产物,主要通过2一亚氨基生物素亲和层析法提纯,1L培养液中含蛋白10~60mg。
链霉亲和素是四聚体蛋白,大小为66KDa。一分子链霉亲和素可以高度特异性地与四分子生物素结合,两者之间的亲和力极为强烈,链霉亲和素-生物素复合物的解离常数处于10mol/L数量级,这一性质常用于分子生物学用途[1]。其中一条完整的SA肽链中有159个氨基酸残基,分子量为16450。
消光系数与蛋白中Tyr含量有关,由于SA中Tyr的含量比AV多,所以SA的比消光系数也较AV为高,两者分别为E1mg/mL=3.40和E1mg/mL=1.57。在282nm上这两种蛋白结合生物素后并不改变其消光系数,而在233nm上,它们结合生物素后郡便其消光系数值增高,现在一般都是利用蛋白的这种吸光特点来测定它们的活性。
链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成,其氨基酸组成中,甘氨酸和丙氨酸的含量较大,而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基;链霉亲和素是一种稍偏酸性(pH6.0)的蛋白质,并且不带任何糖基。在蛋白水解酶作用下,链霉亲和素可在N端10~12和C端19-21间断裂,形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示,1mg链霉亲和素的最高活性可达18U。
参考资料
1.Cooperativehydrogenbondinteractionsinthestreptavidin–biotinsystem.ProteinSci[引用日期2012-09-22]
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