需要制备多抗，因此表达重组蛋白并纯化，用于免疫兔子，
对多抗特异性要求高，要求重组蛋白是越纯越好
GST标签纯化效果好，想用
听说GST优缺点，请大家一一列举
谢谢返回小木虫查看更多

总体来说His tag比较好。
GST比his的specificity高,但是缺点是本身有较强的antigenecity,而且如果蛋白不溶,很难(但不是不能)用变性的方法纯化.当然如果楼主用包涵体immunize兔子,那就无所谓了,可是这样的话,也就无所谓纯化不纯化了.
HIS如果做的好,也很纯.一般来说为了防止各种潜在的失败,可以全都用变性的方法纯化蛋白,因为这样基本可保证HIS tag露在外面,既可以和ni beads结合,而同时纯度又高,再者透析之后也不影响immunization。

引用回帖:2楼: Originally posted by zhaolf at 2013-04-24 10:00:37
总体来说His tag比较好。
GST比his的specificity高,但是缺点是本身有较强的antigenecity,而且如果蛋白不溶,很难(但不是不能)用变性的方法纯化.当然如果楼主用包涵体immunize兔子,那就无所谓了,可是这样的话,也就无 ...
谢谢回复啊，我做过组氨酸纯化，但是GST没做过的，GST纯化的时候不能加尿素吗？
如果设计引物的时候加入蛋白酶切位点，纯化之后用蛋白酶把GST切掉再免疫行不行呢
，

引用回帖:3楼: Originally posted by loop00 at 2013-04-23 18:49:54
谢谢回复啊，我做过组氨酸纯化，但是GST没做过的，GST纯化的时候不能加尿素吗？
如果设计引物的时候加入蛋白酶切位点，纯化之后用蛋白酶把GST切掉再免疫行不行呢...
GST和蛋白的binding是需要GST的结构的,GST变性了怎么抓glutathion?
切掉GST是可以的,不是麻烦嘛。如果会做纯化抗体,不切也行,到时候用抗原纯化呗。

GST标签作为纯化是在his之前的，GST本身比较大，对蛋白表达可能有积极或消极的影响，标签和蛋白之间加酶切位点是一贯的做法，以备是否要除去标签。GST纯化你要加尿素是不是因为你做的包涵体，尿素对蛋白本身其实是有影响的，这就牵扯到蛋白复性的问题，还涉及标签活性。所以现在许多蛋白用his做标签，一个是本身就小，特异性也好，如果怕傍柱不牢，可以加6his或者更多，关键是包涵体蛋白纯化用his标签就没有尿素影响标签的问题了。

引用回帖:6楼: Originally posted by 会思想的芦苇 at 2013-04-25 09:20:20
哥们遇到很很多变性方法都不结合beads的案例，欲哭无泪中……
能讲讲吗？理论上His Tag在尿素里是可以结合镍柱的啊

引用回帖:7楼: Originally posted by loop00 at 2013-04-25 11:44:20
能讲讲吗？理论上His Tag在尿素里是可以结合镍柱的啊...
这就是理论跟实际的差别，死也想不明白，如果谁遇到共同情况 欢迎讨论

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