1.对1.5ml微量离心管做双管标记，每个反应按以下比例加入各反应组分：

5μl5×CaM激酶反应缓冲液

5μl10mmol/L合成肽底物溶液

5[γ-³²P]ATP溶液（ATP终浓度为5mmol/L，放射活性为5μCi/μl）

5μl1mg/ml钙调蛋白或5μl水

0～30μl水

盖好离心管，混匀，放入30℃水浴温育10min。

2.每30s一管依次加入1～25μl酶样品开始反应。加入酶量的容积取决于样品中酶活性的大小。在预试验中所得的最大反应值可衡量磷酸转移反应的程度。在反应中为了保持磷酸基与底物的线性结合关系可适当减小酶的加量。

3.30℃水浴，10min。

4.温浴10min后迅速吸取30μl管中溶液滴在准备好的P⁸¹膜上。