YeastGenomicDNAIsolation

DavidAmberg

1. Grow100mlculturetoabout1x10tothe8th
2. Spin4x15mlsofculturedownabout3kx3min.
3. ResUSPendentirepoolinabout6mlsddH2O,aliqouteinto1.5mlmicrofugetubesandspindown.
4. Aspirateoffsuperandvortexpellettillsuspended.
5. Add200ulsolnA,add200ulPhenol/CHCl3and0.3gacidwashedglassbeads.
6. Vortex2min,add200ulTEpH8andspinatmaxspeedfor5min.
7. Transfersupertoanewtubeandadd1ml100%EtOH,mixbyinversion.
8. Spin2min,pouroffsuperandreconin0.4mlTEpH8+30ug/mlRNaseA.
9. Incubate5minx37¡C,add18ul5MNH4OAcand1ml100%EtOHandstoreat-20¡Cforafewhrs.
10. SpindownDNA10minandreconeachpelletin25-50ulorwhateverconvenientvolume.

• SolutionA:
• 200ulneator2ml10%TritonX-100(2%)
• 1ml10%SDS(1%)
• 200ul5MNaCl(0.1M)
• 100ul1MTrispH8(0.01M)
• 20ul0.5MEDTA(1mM)
• Waterto10ml

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