2021-08-01【求助】有人用过凯基膜蛋白提取试剂盒么~跑wb着急啊~

买了南京凯基的膜蛋白和浆蛋白提取试剂盒，浆蛋白有条带，可是膜蛋白跑了很久没跑出过条带。。。
之前是担心所需组织量不够（要求是200-300mg，我的组织只有20mg左右）才跑不出来，后来换用大鼠心脏测试，组织量绝对够。。。而且在跑western之前进行了说明书上的蛋白浓缩步骤，可是在加loADIngbuffer之后，蛋白沉淀怎么都溶解不掉~说明书也注明了如果有沉淀可以取上清继续上样，可是每次上样感觉样品往上浮，只有部分样品往孔里沉，而且跑出来什么都没有，连内参都没有。用的是β-actin的内参。。
western之前浓缩步骤如下:
1、取所得提取物，每100ul膜蛋白加入约300ul的溶解buffer和约100ul三氯乙酸（TCA）试剂，混匀后置冰上20-30min后，13000rpm，离心15min，尽可能去除上清。
2、沉淀加入1ml丙酮，室温静置10min后，13000rpm离心15min。
3、弃上清，沉淀真空旋干或置冰上干燥10min（敞开离心管盖），按适当体积比加入loadingbuffer（使用前没100ulloadingbuffer加入2-5ulβ-巯基乙醇）溶解，彻底分散（枪头反复吹吸或剧烈涡旋），煮沸5min。【注：加入loadingbuffer后如有部分难容物，可取上清继续上样。】