2021-08-11【共享】底物DNA没有被所用限制性内切酶切断的原因总结！

可以考虑以下几种情况:

1，底物DNA上没有该限制酶的识别、切断位点。特别是一些经过重组等处理的DNA，碱基易发生缺失、变化等。

2，限制酶识别位点上的A或C被甲基化。部分限制酶对识别位点中的碱基是否被甲基化比较敏感，从而无法切断该位点。

3，底物不纯。如果底物DNA中有限制酶阻害物质，回影响限制酶的酶切作用。在此种情况下，底物DNA须重新进行精制。

4，限制酶的识别、切断位点在底物DNA的高级构造中所处的位置，对酶切反应也有一定的影响，例如,限制酶NaeI在切断pBR322DNA时,就有着非常难以切断的部位。

5，限制性内切酶本身无活性或低活性