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人可溶性髓系xi胞触发受体1(sTREM1)ELISA试剂盒
底物范围较广,包括二氨基联苯胺(DAB)、氯萘酚和氨乙基咔唑等。
二氨基联苯胺/金属盐
DAB是辣根过氧化物酶最敏感、常用的底物。它产生强烈的棕色产物,在水和醇中不溶解。多数情况下,推荐在DAB中加入不同的金属离子。当加入金属盐如钴、镍至底物液中,辣根过氧化物酶可以更加敏感。此类反应产物呈暗蓝灰色至黑色,且在水及醇中稳定。DAB/金属盐染色应用的组织染色范围较广。
1.需要的溶液和特殊设备
DAB,0.05mol/LTris缓冲液(pH7.6),0.3%(W/V)氯化镍/水贮存液,30%过氧化氢,DPX,光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果).
2.操作步骤
(1)用9mL0.05mol/LTris缓冲液(pH7.6)溶解6mgDAB;
(2)加lmL0.3%(W/V)氯化镍/水贮存液(也可以用等量的氯化钴替代);
(3)加0.1mL3%过氧化氢。过氧化氢一般以30%的溶液提供,贮存在4℃,此条件可以持续1个月;
(4)如果出现沉淀,用滤纸过滤;
(5)加此溶液至标本,并孵育1~20min水洗终止反应;
(6)优化:如果需要可复染;
(7)用DPX封片。
氯萘酚
氯萘酚可以形成一种蓝黑色产物。敏感性低于DAB,且产物可溶于醇中。它适用于当DAB反应形成较高背景或要求改变产物的颜色。
1.需要的溶液和特殊设备
0.03%氯萘酚,用无水乙醇溶解(贮存在-20℃),0.05mol/LTris(pH7.6),过氧化氢,Gelvatol或者Mowiol,光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)。
2.操作步骤
(1)氯萘酚贮存液的准备:用10mL无水乙醇溶解0.3g氯萘酚,贮存于-20℃;
(2)加100μL氯萘酚贮存液至10mL0.05mol/LTris(pH7.6);
(3)加0.1mL3%过氧化氢于水中。过氧化氢一般是以30%的溶液提供,4℃可存放1个月;
(4)白色沉淀可用滤纸过滤去除;
(5)加此溶液到标本中,并在室温孵育10~40min,水洗终止反应;
(6)优化:如果需要,进行复染,但只可使用水溶性染料;
(7)用Gelvatol或者Mowiol封片。
氨乙基咔唑
氨乙基咔唑(AEC)产生红色产物,其敏感性低于DAB,但可用于DAB反应产生较高背景或要求改变产物颜色的实验。此产物可溶于醇,但不溶于水。
1.需要的溶液和特殊设备
0.4%AEC用N,N—二甲基甲酰胺(DMF)溶解,0.1mol/L乙酸钠缓冲液(pH5.2),过氧化氢,Gelvatol或Mowiol,光学显微镜(通常带有照相机以便于记录结果)。
2.操作步骤
(1)用lmLDMF溶解4mgAEC。AEC在DMF中稳定,因此,可以用100mLDMF溶解0.4gAEC作为贮存液备用;
(2)加lmLAEC溶液至15mL0.1mol/L的乙酸钠缓冲液(pH5.2)中,并搅拌;
(3)加0.15mL3%过氧化氢于水中。过氧化氢一般是30%的溶液提供,在4℃可存放1个月;
(4)用滤纸过滤;
(5)加此溶液到标本中,并于室温孵育10~40min,水洗终止反应;
(6)优化:如果需要复染,只可用水溶性染料;
(7)用Gelvatol或Mowiol封片。
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