Lysis Buffer Proteinase K25 ml 1M Tris pH 8.0 (FC 50mM) 100 mg dry Proteinase K (Sigma #2308)50 ml 0.25M EDTA (FC 25 mM) 4.75 ml H2O10 ml 5M NaCl (FC 100mM) 0.25 ml 1M Tris pH 8.0 5 ml Triton X-100 (FC 1%) 5 ul 1M CaCl2dH2O to 500 ml FC 20 mg / ml, store @ 4 deg. C(FC = Final Concentration) (A cloudy sUSPensionformswithstorage@4deg.C,somixwellbeforeuse)

1. Cut1/2"-3/4"ofmousetail.(Checkwithyourinstitution"sAnimalStudiesCommitteefortheirrecommendationsastohowthisprocedureshouldbeimplemented).
2. Addtailfragment(ortissueofthesamesize)directlyto500ulofextractionbufferandadd50ulofProteinaseK.
3. Incubateovernightat52^o-55^oC.
4. Add500ulofTrispH8.0equilibratedphenol.Mixvigorously,spin(12,000-14,000RPM)atroomtemperaturefor2minutes.
5. Removeaqueousphasetoafreshtube.
6. TotheaqueousphaseaddanequalvolumeofChloroform/IsoamylAlcohol(49:1).Mixvigorously.Spinatroomtemperaturefor2minutes.Removeaqueousphasetoafreshtube.
7. Totheaqueousphaseadd250ul7.5MNH₄OAcand750ulisopropanol.Mixwell.Spinatroomtemperaturefor5minutes.Washthepelletoncewith70%ethanol.
8. Drythepelletusingaspeedvac.
9. ResuspendtheDNAin400ul1XTE;add2ulRNAseA(10mg/ml)andincubateovernightat37^oC.
10. Storeat4^oC.Cut100ul(approximately10ug).

================  蚂蚁淘在线  ================

免责声明：本文仅代表作者个人观点，与本网无关。其创作性以及文中陈述文字和内容未经本站证实，对本文以及其中全部或者部分内容、文字的真实性、完整性、及时性本站不做任何保证或承诺，请读者仅作参考，并请自行核实相关内容

版权声明：未经蚂蚁淘在线授权不得转载、摘编或利用其他方式使用上述作品。已经经本网授权使用作品的，应该授权范围内使用，并注明“来源：蚂蚁淘在线”。违反上述声明者，本网将追究其相关法律责任。