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2007-06-08【求助】提取的RNA,DNA酶消化1小时为何还能扩出目的片段?

leukocyte
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本人提取的RNA,准备反转录做Real-timePCR.由于引物不跨越内含子,所以为了排除基因组DNA的污染.先用DNA酶消化,可是消化了1小时,阳性对照的DNA(PCR产物)消化后跑电泳都看不到带了,说明DNA酶好使啊.可是为何消化后的RNA还能扩出目的片段呢?还有痕量的残留?????
郁闷啊,
也许如mxBDna2003所说:"TAQ（除了具有DNA指导的）还有RNA指导的DNA聚合酶功能，所以是可以直接从RNA中P出来的！"


看了园子里不少关于这类的帖子,RT时被DNA困扰的人还真不少啊------烦请高手指点.大家讨论.
*请输入10-500个字符

相关回复

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回复：时间：2007-06-14

自己顶!!!

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回复：时间：2007-06-13

楼上的在提什么的RNA,我在提细菌RNA时也出现这种情况的

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回复：时间：2007-06-19

我提的是培养的细胞的RNA

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回复：时间：2007-06-15

我细菌ＲＮＡ做ＲＴ时，也出现总ＲＮＡ为模板能够ＰＣＲ出目的条带

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回复：时间：2007-06-12

不知道后来问题解决了吗

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已帮助 0人

回复：时间：2007-06-18

我一般做两次DNaseI处理。基本没有问题，能处理干净。1ug的模板DNaseI用量为1U，一次DNaseI处理，用量不能超过5U。否则酶抽提不干净。

有用（0）

已帮助 0人

回复：时间：2007-06-19

DNA根本无法除净

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