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耐热DNA聚合酶的选择指南 专区
耐热DNA聚合酶特点:合理选择耐热DNA聚合酶是PCR成败与否的一个关键因素,如何选择最合适的耐热聚合酶,是进行PCR实验首先要考虑的问题。目前市面上有许多耐热DNA聚合酶,虽然名称各不相同,但主要区别在于特异性、保真性、耐热性、扩增速率、扩增片段长度等几个指标。TIANGEN公司生产的耐热DNA聚合酶全部采用标准化生产工艺和质量检测标准,是经过多次分子筛、离子交换层析柱纯化的超纯型产品,去除了宿主DNA和蛋白酶等杂质因素的影响,特异性非常好,而且特别稳定,经检测,室温放置1个月,活性不变或改变甚微。 不同耐热聚合酶的比较:Taq:扩增效率最高的耐热DNA聚合酶,能很好的扩增6kb以下的DNA片段。扩增碱基出错率为10-5左右。Pfu:目前保真度最高的耐热DNA聚合酶,碱基出错率为10-6,但扩增效率低于Taq酶,一般能很好的扩增2kb以下的片段。TaqPlus:即扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比Pfu高,保真度比Taq好。能有效的扩增10kb以下的片段。HotstartTaq:经过化学修饰的耐热DNA聚合酶。此酶在常温下,活性被化学基团封闭,要在94-95℃加热数分钟才能回复正常活力开始反应,避免了起始循环较低温度下的非特异性扩增,提高了反应的灵敏度和特异性。LongTaq:具有3’-5’外切酶活性的耐热DNA聚合酶,它不但扩增效率高而且错配率低,对于简单模板可扩增长达40kb的模板,对复杂模板也可扩增长达15kb的片段。TaqPlatinum:热启动高保真耐热DNA聚合酶。如果对保真度要求很高,而用Pfu扩增有难度,可选用TaqPlatinum,一般扩增长度可达4kb。 不同实验对酶的选择:1.克隆普通长度的目的DNA片段(可选产品:Taq、TaqPlus)2.保真度要求较高,片段比较短,如点突变、基因筛选等(可选产品:Pfu、TaqPlatinum)3.高保真长片段扩增,如构建基因图谱及分子遗传学研究等(可选产品:LongTaq、TaqPlus)4.扩增基因组模板,需要降低背景(可选产品:HotstartTaq、TaqPlatinum)5.扩增GC含量较高或二级结构较复杂的模板(可选产品:TaqPlus、LongTaq、TaqPlatinum)6.实时荧光定量PCR反应(可选产品:Taq、HotstartTaq、TaqPlatinum)7.从菌株或质粒模板,筛选鉴定目的克隆,扩增6kb以下的片段(可选产品:Taq、TaqPlus、2×TaqPCRMasterMix)8.模板比较复杂或目的片段丰度低,用普通Taq酶扩增不出条带(可选产品:2×TaqPCRMasterMix、2×PfuPCRMasterMix)
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