1. growupsinglecolonyin1.5mlLB/antibioticovn@37°C
2. pourintotube,spinfor30sec
3. decantsupernatantandresUSPendpelletin100mllysissolution
4. add200mlalkalineSDS,vortexwell
5. incubatefor5minonice
6. add150mlhighsaltsolution,vortexwell
7. incubateforca.10minonice
8. spinfor10min
9. remove400mlsupernatantandtransfertonewtubeprefilledwith400mlisopropanole
10. vortexwellandkeeptubeonicefor10min
11. spinfor10min
12. washpelletwith70%EtOH
13. vacuumdrypelletfor5minandtakeupin100ml1xTE/20mg/mlRNAseA
14. usually1-2mlisenoughfordigest(high-copyplasmid),keepDNAfrozenat-20°C
15. phenolizeimportantprepsiftobekeptforalongerperiodoftime(morethan4-6months)

Remarks:

Evenifkeptat-20°CDNAfromthisqualitywilldegradeoveraperiodofayearorsowhennotphenolizedcarefully(ca.3x)!Takecarethatnointerphaseremains.

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