一、材料

1.缓冲液、溶液和试剂

EDTA，100mmol/L

异丙醇

裂解缓冲液

10mmol/LTris-HCl

1mmol/LEDTA

150mmol/LNaCl

0.5%SDS,pH10.5

NaCl，0.15mol/L和6mol/L

细胞核裂解缓冲液

75mmol/LNaCl

24mmol/LEDTA,pH8.0

蛋白酶K或者链霉蛋白酶，20mg/ml。

SDS,200g/L

蔗糖，lmol/L

Tris-HCl,2mol/L,pH9.2

Triton裂解缓冲液

10mmol/LTris-HCl

5mmol/L,MgCl2

1%TritonX-100

TE缓冲液（lOmmol/LTris-HCl,lmmol/LEDTA,pH7.5)

蔗糖，pH9.2

TritonX-100

2.专用设备

水浴，预热到55°C

破璃棒

3.细胞和组织

处理过的乳腺瘤组织（100mg组织用于激素受体分析）或者用PBS洗过2次的5X105培养细胞。

二、方法

1.向盛有细胞的l0ml管中，加入750ul裂解缓冲液和200ug蛋白酶K(或者链霉蛋酶);55°C保温至少90min,直到沉淀溶解。

2.如果沉淀不容解，重复步骤1。

3.加入250ul6mol/LNaCl,小心地摇动。

4.4°C离心（3000r/min)15min。小心将上清液转移到另一新管中。

5.重复步骤3和4。

6.加入等体积的异丙醇，颠倒离心管直到看见DNA。将DNA缠绕到玻璃棒上，沿管壁轻轻地将DNA拉出，将其转移到300ul的TE或者灭菌双蒸水中。

7.放于4°C，使其溶解。

从10ml血液中提取DNA

8.加入40ml预冷的（4°C)Triton裂解缓冲液。

9.4°C放置30min;每隔几分钟将管子翻转一下。

10.4°C离心（3000r/min)30min，弃上清液。

11.用5~15ml0.9%(0.15mol/L)的NaCl洗沉淀（细胞核）。

12.2300r/min离心10min。

13.弃上清液。细胞核可以保存在-20°C。

14.加入3ml细胞核裂解缓冲液，摇匀。

15.加入25ul链霉蛋白酶（20mg/ml)和230ul10%SDS，室温振摇过夜。

16.加入1ml6mol/L的NaCl，摇勾。

17.4°C离心（3000r/min)15min，小心将上清液转移到另一新管中。

18.重复步骤10。

19.加入等体积的异丙醇，上下颠倒离心管直到看见DNA。将DNA缠绕到玻璃棒上，沿着管壁轻轻地将DNA拉出，将其转移到400ul的TE或者灭菌双蒸水中。

20.放于4°C,使其溶解。