• BiotinylationofAntibody(ContributedbyNanciDonacki)
• Antibodylabeling(HouseEarInstitute)LabelingprotocolsusingaffinityMarkers.
• CouplingColloidalGoldtoProtein(WalterSteffen)
  • GoldlabellingofrabbitIgG
  • Preparationofenzymegoldcomplex
  • CouplingofNanogoldtoIgG
• ProductionofColloidalGold(WalterSteffen)
• Protein(Antibody)FluorescentLabeling(MarioRoederer)Detailedprotocolforconjugationofproteins(principallymonoclonalantibodies)tofluorescentdyes.Theconjugationsfallintofourbasicprotocols:Type1(usedforFITC,Cy5,andtheinitialpreparationoftheCy5andCy7tandemdyes);Type2(usedforBiotinandCascadeBlue);Type3(usedforconjugationofPE,APC,TR-BSA,andtheirderivatives);andType4(usedfortheinitialpreparationofnon-immunoglobulinproteinslikeAnnexinV).Proceduresfortheconjugationofimmunoglobulinsareprovidedforthefollowingmolecules:
  • Fluorescein(FITC)
  • Phycoerythrin(PE)
  • Cy5PE
  • Cy7PE
  • TexasRed(TR)
  • Allophycocyanin(APC)
  • Cy5
  • Cy7APC
  • CascadeBlue
  • Biotin

Inaddition,protocolsforconjugationofAnnexinVtothefollowingmoleculesaregivenasmodelsforfluorescentconjugationofnon-immunoglobulinproteins.

• FITC
• PE
• TR-BSA
• APC
• CascadeBlue

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