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/发布时间:1626715802 /浏览量:444
| 实验方法原理 | 氯胺桾即对甲苯碘氯胺钠，在水溶液中生成次氯酸，为一种温和氧化剂，当加入到有蛋白质和碘的弱碱水溶液中，可将I2氧化为I＋并结合到氨基酸上。如标记条件温和，标记后的McAb仍具有良好的结合活性，通过放射性同位素强度的测定可反映相应抗原的含量。 | ||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 实验材料 | McAb125I 试剂、试剂盒 | 磷酸缓冲液氯胺桾偏重亚硫酸钠KIBSA 仪器、耗材 | 超净台γ计数仪PD10柱
实验步骤 | 1. 在细胞冻存管内加入纯化的McAb100μg/100μl，再加入10μl0.05M磷酸缓冲液，再加入10μl（含1mCi）125I 2. 加入10μl氯胺-T（5mg/ml溶于0.05M磷酸盐缓冲液），孵育时间不超过30秒 3. 加入100μl偏重亚硫酸钠（1.2mg/ml溶于0.05M磷酸缓冲液） 5. 用PD10柱（SephadexG25）除去游离125I。用4％BSA、PBS洗脱 结合于McAb125I放射性强度（cpm） 标记率（％）＝─────────────────── 总放射性强度（cpm） 结合于某一管McAb上的放射性强度 比活性（μCi/μgMcAb）＝──────────────── 某一管McAb总量 注意事项 |
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