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【求助】瞬转、稳转? 细胞技术讨论版
qydsmile2021-08-21
可以做了 又不用表达个几十天的.....
GFP稳定转染的细胞做免疫荧光,被固定后到最后荧光显微镜下观察时, G...
寞比sln2021-08-20
之前转染了带GFP的质粒，冻存估计有半年了拿来复苏，想做后续实验，结果稳转的细胞荧光少还很弱，请问怎么办？急急急！.....
稳转细胞株构建/稳定株构建/耐药细胞株_价格厂家供应商_和元...
lifengna2021-08-19
稳转细胞株进行细胞增殖和周期时是否还需要加G418.....
实验Q&A:如何用慢病毒转染构建稳转细胞系
耳语仏2021-08-18
稳转细胞系常用的方法有质粒转染和慢病毒转染进行稳定株筛选，前者操作简单，但是成功率很低，费时，假阳性高，最后可能导致几个月的工作白干了，慢病毒稳定株筛选方法比较简单，并且慢病毒本身具有稳定整合入基因组的特性，没有假阳性，慢病毒。.....
转染前细胞长到多少比较合适做实验
蘑菇头丌Nj6R2021-08-18
细胞 （英文名：cell）并没有统一的定义，比较普遍的提法是：细胞是生物体基本的结构和功能单位。已知除病毒之外的所有生物均由细胞所组成，但病毒生命活动也必须在细胞中才能体现。一般来说，细菌等绝大部分微生物以及原生动物由一个细胞组成，即单细胞生物，高等植物与高等动物则是多细胞生物。细胞可分为原核细胞、真核细胞两类，但也有人提出应分为三类，即把原属于原核细胞的古核细胞独立出来作为与之并列的一类。研究细胞的学科称为细胞生物学。细胞体形极微，在显微镜下始能窥见，形状多种多样。主要由细胞核与细胞质构成，表........
稳定转染细胞系的建立观察生物探索
无聊7Ns2021-08-17
这个要看细胞的状态和蛋白表达特点。推荐了解“主细胞库”“工作细胞库”这两个名词。.....
禁输大潮又双叒叕来了!21000多家医疗机构全部禁止输液!
安卓20062021-08-17
准备养细胞，原代培养，刚刚取下来的组织块怎么保存吗几小时内用的可以放在冰盒里，一个月左右的可以放在-20度冰箱，更长时间的就要放-80度冰箱了。.....
求助!!吸血虫细胞转染用什么转染试剂转染效率高!!
蓝天98962021-08-17
HAC15细胞转染，目前用的lip3000、lip2000都用过，不知道是试剂剂量使用问题，还是购买试剂问题，荧光显微镜一个视野下好的有几个荧光，有得没荧光，没荧光，没荧光，求HAC15细胞转染用什么转染试剂转染效率高！！！.....
小白求助:shRNA质粒稳转细胞一般能转几个进去
血魇DUV2021-08-16
两种质粒是可以同时进入同一个感受态细胞的,比如构建腺病毒载体时.但是要求两种质粒进入同一个感受态细胞,转化效率非常低,一般需要电转或者其他的特殊处理.由于质粒的不兼容性,拥有同种复制子的质粒不能在同一细胞内稳定共存,经过几代的复制,会质粒丢失,所以并不是任何两个或两个以上质粒都可以在同一细胞内稳定存在,但是可以同时进入.稳定转染的细胞株，就是转染后质粒可以稳定整合到基因组上不会因细胞分裂而丢失。区别于质粒瞬时转染不能长时间保留质粒在细胞里。.....
细胞转染为什么不能加血清
驚嘆13312021-08-16
传统的转染试剂有一定的细胞毒性，在转染过程由于提高细胞的通透性因而不能在培养基中添加抗生素。如，阳离子脂质体。带正电的脂质体与核酸带负电的 磷酸基团 形成复合物被细胞内吞。血清中含有大量的蛋白质，在转染过程中，带负电的蛋白质可能干扰阳离子脂质体对核酸的吸附，影响转染效率。另外，使用脂质体等转染 试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故不能有血清转染。这些转染试剂要求在转染前换无血清培养基，转染后 4-6h在更换成有血清培养基，这其实是为了减轻转染造成的细........
细胞培养中出现的小黑点到底是什么那?
RaySunE8YN2021-08-16
实验室培养的原代猪肺微血管内皮细胞出现了图中黑色线状类似虫子一样的东西的污染，培养基无明显浑浊变化，细胞形态也正常，更换培养基后这种情况仍然存在，求大神告知这些小东西到底是什么，是否会对细胞造成影响.....
磷酸钙转染
肥沙褐匀0012021-08-15
转染的话一般是以克数来规范转染的质粒数量,所以会有很多质粒.一般转染的质粒除了带有需要过表达的基因以外,还需要带有标记基因.标记基因可以被特定的抗体检测,从而判断是否有效表达.如果你要过表达的是某种蛋白,也可以直接通过该蛋白的抗体检测,对照是没有转染的同种细胞,这样表达效果就可以通过WESTERN BLOT看见了.过表达倒没什么标准,每种蛋白表达量也不一致,选择适合自己的浓度就好. 顺转的话,我们实验室采用lipo2000,具体步骤百度文库有,英文的protocol在lipo2000的说明书上也........
献给初学者:大神教你瞬时转染快,准,狠_实验方法_
蓝天98962021-08-15
用lip3000转染HAC15细胞，目的把质粒转入细胞，现阶段把带EGFP的质粒转进去就难，荧光显微镜下荧光很少，可以数清，按照lip3000说明书转染的（剂量有适当调整），求转染高手指点方法！！.....
原代细胞分离培养鉴定以及检测等整体课题服务 实验方法
快乐一点点2021-08-15
各位专家们大家好，最近在做一些原代细胞相关实验。细胞是自己分离提取的，老板说直接用就行。我想问问大家一般都会做鉴定吗？如果做鉴定是什么方法？普通的鉴定与检测一般都会做，我想咨询的是大家有没有一整套完整的原代细胞检测及鉴定方案。小小10蚁豆敬上，求大神解答！.....
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