荧光染料

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实验材料
试剂、试剂盒
仪器、耗材
实验步骤
1. 将湿纸巾铺于载玻片盒底部做成加湿盒,由冰冻切片仪中取出载有切片的载玻片,放入玻片盒中(每边放6片),或故湿盒中(载玻片勿相互接触)。
 
2. 待载玻片达室湿且未干时,铺加PBS于切片上(勿溢出玻片)。
 
3. 稀释的第一杭体于4℃用微量离心机以13500g离心2min(每一载玻片上加40~50μl抗体,应能盖住切片)。
 
4. 用与泵相连的巴斯德吸管,在切片的一端吸去玻片上的PBS,并从另一端加上抗体,盖上加湿盒,室温温育1h。

5. 以PBS冼玻片3次(5min/次),从切片一端加入新的PBS缓冲液,由另一端吸去旧的缓冲液。

6. 稀释的生物素酰化第二抗体于4℃用微量离心机以13500g离心2min(每一载玻片用40~50μl抗体)。

7. 加第二抗体于切片上,置加湿盒中,室温温育1h。
 
8. 以PBS洗玻片3次(毎次洗15min)加荧光染料-链亲和素于切片上(每一载玻片用40~50μl抗体)。置加湿盒中、室温温育1h,以PBS洗玻片3次。

9. 将盖玻片放于纸巾上,滴加1滴Gelvatol于盖玻片中央。翻过载玻片放于盖玻片上(勿施压),将玻片置工作台上,用铝箔覆盖避光放置30min,使Gelvatol凝结。
 
10. 显微镜下观察结果,或置玻片盒中贮于4℃。