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分子生物学实验中常用的电泳缓冲液主要有三种:TAE、TBE和TPE.TBE与TPE缓冲容量高,DNA分离效果好,但TPE会导致DNA片段回收时含磷酸盐浓度高,容易使DNA沉淀。TAE缓冲容量低,但价格较便宜,TBE缓冲液含有的EDTA 可螯合二价阳离子,可抑制DNase活性,防止PCR扩增产物降解。
TAE缓冲液的特点:
TAE是使用最广泛的缓冲系统。其特点是超螺旋在其中电泳时更符合实际相对分子质量(TBE 中电泳时测出的相对分子质量会大于实际分子质量),且双链线状DNA在其中的迁移率较其他两种缓冲液快约10%,电泳大于13kb的片段时用 TAE缓冲液将取得更好的分离效果,此外,回收DNA片段时也易用TAE缓冲系统进行电泳。TAE的缺点是缓冲容量小,长时间电泳(如过夜)不可选用,除非有循环装置使两极的缓冲液得到交换。
TBE缓冲液的特点:
TBE缓冲液也是常用的核酸电泳缓冲盐溶液,主要用于DNA的琼脂糖凝胶电泳。TBE的主要成分是Tris-硼酸盐与 EDTA,缓冲能力强,适合较长时间电泳,分辨率较高,电泳小于1kb的片段时分离效果好。TBE缓冲液中的硼酸成分会影响DNA 回收效率以及后续的酶反应,TBE用于琼脂糖凝胶时易造成高电渗作用,并且因与琼脂糖相互作用生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物而使DNA 片段的回收率降低,所以不宜在回收电泳中使用。若要进行DNA片段的琼脂糖凝胶电泳回收实验,建议使用TAE缓冲液。
北京索莱宝科技有限公司自产产品5×TBE缓冲液和50×TAE缓冲液,货号分别为T1050和T1060,5×TBE缓冲液为5×浓缩液,工作浓度为0.5×,可直接用蒸馏水稀释10倍后使用。50×TAE缓冲液为50×浓缩液,工作浓度为1×,可直接用蒸馏水稀释 50倍后使用。若产品出现沉淀析出,请置于37℃水浴使其溶解,不影响使用及实验效果。
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